朱砂叶螨P-糖蛋白与阿维菌素抗性关系研究

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朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)是一种世界性害螨,因其世代周期短、繁殖能力强、受药机会多、近亲交配率高等特点而极易产生抗药性。阿维菌素是一类具有杀虫、杀螨和杀线虫活性的大环内酯化合物,随着使用频率的不断增加,已有不少害虫对其产生了抗药性。P-糖蛋白(P-glycoprotein, Pgp)是ABC(ATP-binding cassette)转运蛋白超家族成员之一,主要功能是利用其与ATP的结合和水解供能进行底物的跨膜转运,保护组织免受内源性代谢物和外源性有毒物质的伤害。近年来已有研究表明许多寄生虫和昆虫对阿维菌素产生抗药性与PgP有关。PgP引起的抗性也称MDR (multidrug resistance)。本论文重点研究朱砂叶螨对阿维菌素的抗药性与P-糖蛋白的相关关系,获得了以下主要研究结果:1.室内抗性筛选获得了朱砂叶螨阿维菌素抗性品系(AbR,抗性倍数超过20倍),经PgP特异性抑制剂维拉帕米处理12 h后,阿维菌素对朱砂叶螨敏感品系(SS)和AbR的毒力分别增大了19.91%和74.51%,初步说明PgP在阿维菌素抗性品系中作用更明显,与阿维菌素抗性形成有关。2.朱砂叶螨P-糖蛋白ATP酶动力学测定结果为:Km分别为1.835 ± 0.142 mM(SS)和1.595 ± 0.353 mM (AbR), Vmax分别为0.097 ± 0.036μmol/mg/min (SS)和0.108 ± 0.054μmol/mg/min (AbR); Km和Vmax在敏感和抗性品系间无显著差异。3.对朱砂叶螨P-糖蛋白ATP酶进行活性测定,结果发现该酶在AbR的活性显著高于SS;用低剂量阿维菌素(LC30)分别对朱砂叶螨SS及AbR品系的雌成螨进行诱导后,ATP酶活性在SS中没有显著变化,但在AbR中表现为活性在诱导后显著升高。4.克隆获得两条朱砂叶螨P-糖蛋白基因,分别命名为TcPgpl和TcPgp2。其中TcPgp1 cDNA序列全长3885 bp,编码1295个氨基酸;TcPgp2 cDNA序列全长3879bp,编码1293个氨基酸。两条基因皆具有Walker-A、C-motif、Walker-B、D-loop和H-loop等特征序列。5.序列分析表明SS和AbR品系中TcPgp1和TcPgp2基因不存在氨基酸水平差异。RT-qPCR分析结果表明TcPgp1在各螨态的表达量差异不显著,而TcPgp2在卵和幼螨的表达量显著高于若螨和成螨; TcPgp1和TcPgp2的表达量在敏感和抗性品系之间均没有显著性差异。药剂诱导实验表明,SS品系TcPgp1和TcPgp2的表达量均没有显著变化,但AbR品系TcPgp1和TcPgp2的表达量在诱导后均显著
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