【摘 要】
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端粒酶是最重要、最普遍的肿瘤特异性的生化标志之一。在生理条件下,正常细胞大都没有端粒酶活性表达;而在90%以上的肿瘤细胞中有高水平表达。人端粒酶逆转录酶(human telome
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端粒酶是最重要、最普遍的肿瘤特异性的生化标志之一。在生理条件下,正常细胞大都没有端粒酶活性表达;而在90%以上的肿瘤细胞中有高水平表达。人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是端粒酶复合物的核心成分,是细胞调控端粒酶活性的关键环节。bax基因是主要的促凋亡基因,属于bcl-2基因家族,BAX和BCL-2通过形成同源或异源二聚体来调节细胞凋亡。增强子(enhancer)是一段能增加同它连锁的基因转录频率的DNA序列。本研究根据端粒酶只在肿瘤细胞中表达的特点,克隆了hTERT启动子,通过CMV增强子增加hTERT启动子下游bax基因的转录表达,将hTERT启动子联合促凋亡基因bax构建表达质粒CMV-pct-bax,使bax基因只促进肿瘤细胞凋亡。转染CMV-pct-bax表达质粒到MCF-7细胞中,通过Western blot实验,观察BAX在MCF-7细胞中表达增加而BCL-2则降低。MTT实验表明CMV-pct-bax表达质粒对MCF-7细胞有抑制作用,通过形态学观察、DNALadder、流式细胞仪检测细胞周期实验表明CMV-pct-bax质粒对MCF-7细胞具有促进凋亡作用。从而为肿瘤靶向基因治疗提供了一种很有希望的途径。
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