乳腺癌作为女性最常见的恶性肿瘤之一,在女性患癌比例中高达30%,而我国乳腺癌患病率逐年增加,新发病率和死亡率约占世界总病率的12.2%和9.6%。作为乳腺癌传统的治疗方法,手术治疗、化疗和放疗在应用的同时伴随着如:脱发、恶心、呕吐、血栓和骨髓抑制等严重的副作用。因此,开发具有低毒副作用的新型抗癌药已刻不容缓。多年来,随着对中药研究的不断深入,越来越多的人发现,中药在预防和治疗癌症方面不仅具有显著的治疗效果而且毒副作用很小。很多的亚洲国家也均已形成完整的理论、诊断和治疗体系,因此其在世界范围内的应用也愈发广泛。中医理论认为乳腺癌发生是受气郁、瘀血、痰浊等情志因素影响,其中以肝郁气滞为首。疏肝化癥膏是张越教授依据“疏肝解郁、养血健脾以治本;软坚散结、清热解毒以治标”的中医理论自主开发的治疗乳腺癌的经验用方,其在临床上已有满意的疗效,但由于其作用机制不祥,使其应用受到了限制。因此,开展疏肝化癥膏的作用和机制研究十分必要。研究目的:通过对MDA-MB-231细胞的增殖和凋亡研究,证明疏肝化癥膏对乳腺癌的抑制作用,发现疏肝化癥膏对乳腺癌的一个抑制机制,为疏肝化癥膏在乳腺癌治疗方面的临床应用提供重要的实验依据。研究方法:采用CCK8法和平板克隆形成实验,研究不同浓度的疏肝化癥膏对MDAMB-231细胞的活力及增殖影响;采用Hoechst 33342染色法、流式细胞术和JC-1染色法检测疏肝化癥膏对MDA-MB-231细胞的凋亡影响;采用Western blot方法检测疏肝化癥膏对细胞内Bax、Bcl-2和cleaved-caspase 3表达的影响;利用实时定量PCR法检测疏肝化癥膏对PTEN的mRNA表达的影响;采用Western blot方法检测疏肝化癥膏对MDA-MB-231细胞内PTEN蛋白表达及对PTEN下游作用分子AKT活化的影响。研究结果:首先,与对照组相比,不同疏肝化癥膏浓度组作用后细胞活力均显著降低(P<0.001～0.0001),以80mg/mL浓度最为明显(P<0.0001);其次,疏肝化癥膏能增加细胞内促凋亡蛋白Bax的含量(P<0.01～0.001),降低细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的含量(P<0.05～0.01),并显著促进caspase 3的活化(P<0.01～0.001),最终导致MDA-MB-231细胞发生凋亡。最后,实验发现疏肝化癥膏能通过上调MDA-MB-231细胞内PTEN的表达(P<0.05～0.001)从而降低AKT的活化(P<0.05～0.001)。研究结论:(1)疏肝化癥膏能抑制MDA-MB-231细胞的增殖。(2)疏肝化癥膏能促进MDA-MB-231细胞凋亡。(3)疏肝化癥膏可通过增加MDA-MB-231细胞内PTEN的表达,进而减少细胞内p-AKT的含量,从而影响PI3K/AKT信号通路,发挥对MDA-MB-231细胞的抑增殖和促凋亡作用。(4)疏肝化癥膏可用于对乳腺癌的治疗。