目的:探讨肉苁蓉水提液及其单体成分松果菊苷通过调节T淋巴细胞因子IL-2,对成骨细胞增殖以及OPG、RANKL mRNA表达的影响。方法:(l)采用HPLC法测定肉苁蓉水提液中松果菊苷的含量,色谱柱:Inertsil ODS-5PC18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.4%磷酸溶液(B),梯度洗脱;检测波长:333nm;柱温:30℃;流速:1.OmL/min;进样量:10μL。并进行线性关系考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验和加样回收率试验。(2)培养小鼠T淋巴细胞,以5、5×10-1、5×10-2mg/mL浓度的肉苁蓉水提液和5×10-2、5× 10-3、5× 10-4mg/mL浓度的松果菊苷分别干预处理细胞24、48、72h。CCK8法检测药物对T淋巴细胞的增殖情况,ELISA法检测T淋巴细胞培养上清中IL-2的表达水平。(3)收集5× 10—1mg/mL肉苁蓉水提液干预处理T淋巴细胞24h的细胞培养上清和5× 10-4mg/mL松果菊苷干预处理T淋巴细胞48h的细胞培养上清,培养小鼠成骨细胞,分别以30%、20%、10%各药物干预的T淋巴细胞培养上清干预处理成骨细胞24、48、72h。CCK8法检测T淋巴细胞培养上清对成骨细胞的增殖情况,RT-PCR法检测T淋巴细胞培养上清对成骨细胞OPG、RANKL mRNA表达水平的影响。结果:(1)松果菊苷在44.9397～539.2764μ g/mL的浓度范围内线性关系良好(r=0.9998);加样回收率为 94.59%～105.31%(RSD=2.93%,n=9);三批肉苁蓉药材水提液中松果菊苷的平均质量分别为15.527mg/g、7.347mg/g、12.267mg/g。(2)与对照组比较,5×10-1、5X 10-2mg/mL肉苁蓉水提液干预处理T淋巴细胞24h能够显著促进细胞的增殖,其中,5×10-1mg/mL浓度组能够促进细胞因子IL-2的表达。5× 10-4mg/mL松果菊苷干预处理T淋巴细胞24、48、72h,其对细胞的增殖具有显著的促进作用。5×10-4mg/mL松果菊苷干预处理48、72h后,能够促进细胞因子IL-2的表达,其中,48h作用效果更显著。(3)与对照组比较,肉苁蓉水提液干预的T淋巴细胞培养上清(10%)干预处理成骨细胞72h,能够促进细胞的增殖,上调OPG mRNA的表达水平以及下调RANKL mRNA的表达水平。松果菊苷干预的T淋巴细胞培养上清(10%)干预处理成骨细胞72h,能够显著促进细胞的增殖以及OPG mRNA的表达,同时对RANKL mRNA的表达具有显著的抑制作用。结论:所建立的HPLC法结果准确,重复性好,适用于肉苁蓉水提液中松果菊苷的含量测定,可作为肉苁蓉水提液的质量控制方法。肉苁蓉水提液以及松果菊苷对T淋巴细胞的增殖以及细胞因子IL-2的表达具有促进作用,并可能通过细胞因子IL-2调控OPG/RANK/RANKL信号通路促进成骨细胞的增殖。