中药材所含化学成分、营养物质丰富,受温度、湿度、氧气等外界条件的影响,在种植、采收、加工及储藏、运输等过程中极易污染产毒真菌(黄曲霉、炭黑曲霉、鲜绿青霉等)而霉败变质。常用的中药材防霉手段包括远红外、微波、二氧化硫熏蒸方法和不产毒菌株对抗技术等,虽然优势明显,但同时存在各自的缺陷或弊端,如杀菌不完全、化学残留、对中药材造成破坏等。而由植物精油所制备的天然植物防霉剂具有绿色、高效、无毒、无污染的特点,且气味芳香,有利于实际应用,前景广阔。基于此,本研究在考察植物精油对常见产毒真菌如黄曲霉、炭黑曲霉和鲜绿青霉抑菌效果的基础上,以植物精油为基础物质,通过处方筛选,制备绿色、高效、无残留、无污染的天然植物防霉片剂,对其质量进行考察后进一步评价其在三七和干姜等中药材中的防霉效果并及探究毒素-有效成分含量变化的规律。具体研究成果如下:1天然植物防霉片剂的处方及制备研究采用培养皿法筛选肉桂和山鸡椒精油等11种植物精油对黄曲霉菌、炭黑曲霉菌和鲜绿青霉菌的抑菌效果,以同浓度精油作用下培养皿中最小直径菌圈为最佳。结果表明,肉桂、山鸡椒、百里香和玫瑰草精油对3种真菌抑菌效果最好。最低抑菌浓度考察进一步确定肉桂精油对黄曲霉和炭黑曲霉的抑制作用最强,山鸡椒精油对鲜绿青霉抑制作用最强。综上,选择两种精油复合应用,并确定最佳配比为1:3。以此为基质,以精油最佳吸附量、片剂外观、成型性等为指标,采用单因素考察法筛选并确定吸附剂等辅料的种类和用量;以外观、硬度、成型性等为指标,确定压片的工艺条件。最终选择1%微粉硅胶为吸附剂和助流剂,40%乳糖和60%微晶纤维素为稀释剂和黏合剂,1%硬脂酸镁为润滑剂,30μL精油加入量制备天然植物防霉片剂。2天然植物防霉片剂的质量及稳定性初步研究通过对本研究中所制备的天然植物防霉片剂的脆碎度和片重差异考察发现,片剂硬度均>7kgf,脆碎度良好,重量差异符合《中国药典》(2015版)要求,可大批量生产。采用重量减失法考察天然植物防霉片剂的释放速率,发现片剂中精油的释放速率受空气流速、温度、湿度和精油含量等因素不同程度的影响。研究结果表明,温度对片剂释放速率影响显著,空气流速、湿度、精油含量对片剂释放速率影响不显著。另外,外观稳定性实验表明天然植物防霉片剂在动态环境中时30天内稳定;静态环境中4、25和40℃保存90天稳定。GC-MS分析表明,片剂内精油主要成分无变化,肉桂醛(25.09%)、柠檬醛(53.42%)平均含量较高,稳定性良好,温度越高,损失越严重,4℃保存有效成分损失最小,在实际应用时应注意保持密闭、低温干燥。湿度和精油加入量对片剂中精油的释放影响不显著。3天然植物防霉片剂在干姜防霉中的应用首先建立UFLC-MS/MS同时测定黄曲霉毒素B1(AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)和赭曲霉毒素A(OTA)的分析方法。通过“反式培养”(人为地对未霉变药材接种霉菌孢子后培养)(28℃,90%RH)的方式,以干姜外观形态变化和真菌毒素含量为指标,考察20天内干姜发霉后的产毒情况及天然植物防霉剂对干姜产毒的影响。结果表明,染菌2天后,干姜观测到明显的菌丝,扫描电镜观察确认其表面有孢子存在且逐渐增多,毒素测定结果表明AFB1和OTA含量较高;天然植物防霉剂作用下的姜粉培养16天后仅出现少量菌丝,毒素测定结果显示姜粉16天内无AFs或OTA检出,20天时少量的AFB1和OTA被检出。提示,天然植物防霉片剂能较好地抑制干姜发霉和产毒。建立UPLC-PDA同时测定姜粉中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和6-姜烯酚含量的分析方法。通过“反式培养”(28℃,90%RH)的方式,以干姜中四种有效成分含量为指标,考察干姜发霉后的成分变化情况及天然植物防霉剂对干姜有效成分变化的影响。结果表明,感染黄曲霉、炭黑曲霉和鲜绿青霉的干姜在“反式培养”(28℃,90%RH)过程中,有效成分整体上呈现降低趋势,6-姜烯酚含量先增高后降低,6天后产生一种新成分且含量逐渐增加。天然植物防霉剂作用下的干姜“反式培养”20内6-姜酚、8-姜酚、10姜酚、6-姜烯酚的含量基本无变化。提示,天然植物防霉剂可显著抑制干姜的霉变产毒,进而保证干姜有效成分不流失,提高药效,降低毒性。4天然植物防霉片剂在三七防霉中的应用首先建立UFLC-MS/MS同时测定AFB1、AFB2、AFG1、AFG2和OTA的含量的分析方法。通过“反式培养”(人为的对未霉变药材染菌培养)(28℃,90%RH)的方式,以三七的外观形态变化和真菌毒素含量为指标,考察三七发霉后的产毒情况及天然植物防霉剂对三七产毒的影响。结果表明,染菌4天后,三七表面有明显的菌丝出现,AFB1和OTA含量较高;天然植物防霉剂作用下的三七表面没有任何菌丝出现,且无毒素AFs或OTA检出。提示,天然植物防霉片剂能较好的抑制干姜发霉和产毒。建立HPLC-PDA同时测定三七中三七皂苷R1、Rg1和Rb1含量的分析方法。通过“反式培养”(28℃,90%RH)的方式,以三七中三种有效成分含量为指标,考察三七发霉后的成分变化情况以及天然植物防霉剂对三七有效成分变化的影响。结果表明,感染黄曲霉、炭黑曲霉和鲜绿青霉的三七在“反式培养”(28℃,90%RH)过程中,有效成分Rg1的含量下降显著,R1和Rb1的含量无显著变化;天然植物防霉剂作用下的三七在“反式培养”20内R1、Rg1和Rb1的含量无显著变化化或略升高,期间存在波动,可能与个体间差异有关。提示,天然植物防霉剂可显著降低三七的霉变,提高药效。