【摘 要】
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利用已构建的基因工程重组菌BL21(DE3)表达猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2编码的结构蛋白,并成功摸索出一种快速纯化该蛋白的方法.用纯化的蛋白作为包被抗原,建立了检测猪血清中PCV
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利用已构建的基因工程重组菌BL21(DE3)表达猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2编码的结构蛋白,并成功摸索出一种快速纯化该蛋白的方法.用纯化的蛋白作为包被抗原,建立了检测猪血清中PCV2抗体的间接ELISA方法;以该方法为基础初步组装出试剂盒,并进行了初步应用.对ELISA的反应条件进行了探索,确定了最适工作条件.结果表明,重组蛋白抗原的最适包被浓度为0.1μg/mL,最适包被条件为37℃2h加4℃过夜;待检血清的稀释度为1:40;HRP-兔抗猪IgG的工作浓度为1:800;待检血清和酶标二抗的反应条件和反应时间均为37℃30min;底物室温显色10~15min;阴阳性临界值为0.4.经阻断试验、交叉反应试验和重复性试验,表明建立的间接ELISA方法是特异的,且重复性很好;与间接免疫荧光试验(IFA)进行比较,其敏感性和特异性分别是94.3﹪和90﹪,说明两种检测方法间无显著性差异;进行了试剂盒的组装及其保存期试验,结果表明试剂盒在4℃下至少可保存三个月.用试剂盒检测人工感染PCV2组织毒的SPF小香猪血清,并绘制血清中抗体变化的动态曲线.结果显示,攻毒后14~21天血清抗体出现阳转化,抗体水平的高峰期出现在感染后28~35天,其后,抗体水平开始下降.用试剂盒对中国13个地区70个规模化养猪场的2007份猪血清进行了PCV2感染的普查,结果表明自1997年以来PCV2感染已在中国普遍存在.
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