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目的:本研究通过提取非综合征性唇腭裂患者及正常人的血浆外泌体,并对外泌体的浓度进行测量分析,探讨血浆中外泌体浓度与唇腭裂发生之间的关系。进一步抽提外泌体中miRNA,运用miRNA测序筛选出非综合征性唇腭裂患儿血浆外泌体中异常表达的miRNA,并进行生物信息学分析,预测其参与的生物学过程及信号通路。方法:收集8例非综合征性唇腭裂患儿以及性别年龄与之相匹配的8名健康儿童的外周血10ml,通过离心分离血浆,利用QIAGEN exoEasy Maxi Kit试剂盒,使用超滤法提取血浆中的外泌体;在透射电镜下观察外泌体的形态、测量其大小,并计数,BCA法测定外泌体蛋白浓度,并进行统计学分析。另采用Trizol法提取外泌体中的miRNA,构建miRNA文库,用Agilent2100 miRNA微阵列芯片分析,筛选显著差异表达的miRNA,预测其相应的靶基因,并进行GO富集分析和KEGG通路富集分析。结果:第一部分:本研究成功从16例血浆样本中分离外泌体,透射电镜下观察到30-100nm大小不一的囊泡状结构,符合外泌体的电镜表现,在透射电镜相邻的四个视野下,测得外泌体总数量47,最小直径为40nm,最大直径为99nm,直径集中于60-80nm区间;对提取的血浆外泌体浓度进行统计学分析,各组外泌体的浓度无统计学差异。第二部分:本研究血浆外泌体中抽提的miRNA的浓度,达到文库构建所需的浓度要求,且质检结果显示满足测序要求。测序miRNA总read结果显示非综合征性唇腭裂患者血浆外泌体中的miRNA的clean reads高于正常人群。分别将两组样本的clean reads与miRBase对比,结果显示两组样本中非综合征性唇腭裂患者血浆外泌体中的miRNA种类数没有明显差异,正常人血浆外泌体中的miRNA种类数也没有明显差异。但是,非综合征性唇腭裂患者血浆外泌体中的miRNA种类数较正常人稍多,这说明异常表达的miRNA可能会对非综合征性唇腭裂的发生产生影响。利用T-test分析实验组(非综合征性唇腭裂患儿组)与对照组(正常儿童组)两样本间显著差异表基因后,经过筛选实验组与对照组出现差异表达的miRNA共18条,P值均<0.05,具有统计学意义。实验组较对照组表达上调的14条,表达下调的4条。对差异表达的miRNA的预测靶标进行了GO和KEGG通路富集分析,共产生6747种可能的靶基因。富集的GO术语显示其靶基因功能富集于多细胞生物发育、转录调节、信号转导、蛋白质结合及外泌体等30个生物学过程。异常表达的miRNA靶基因通过KEGG数据库进行通路富集分析,其靶基因信号通路富集于赖氨酸降解、Wnt信号传导、MAPK信号传导、TGF-β信号传导及钙信号传导等304个信号通路。结论:1.非综合征性唇腭裂患者外周血血浆中存在外泌体,形态与正常人血浆外泌体相同。2.非综合征性唇腭裂患者外周血中外泌体浓度较健康对照者无显著性变化。3.非综合征性唇腭裂血浆外泌体中miRNA有14条表达上调,4条表达下调。4.非综合征性唇腭裂患者血浆外泌体中差异表达的miRNA预测出的靶基因富集于Wnt、TGF-β等多个信号通路,相关信号通路可能影响非综合征性唇腭裂的发生。