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研究背景艾滋病作为当今世界影响重大的流行性疾病,也是当前人类健康面临重大威胁的疾病。但是,一直以来缺乏有效的治疗药物和疫苗。人类免疫缺陷病毒为Ⅰ型包膜病毒,采用病毒宿主细胞膜融合机制。病毒表面糖蛋白结合到宿主细胞受体后,启动病毒融合蛋白的一系列构象变化。包膜病毒进入靶细胞的过程需要病毒膜糖蛋白的介导,这一类型病毒的包膜蛋白一般都包括两个亚基,不跨膜的亚基(如HIV的gp120)能够与靶细胞膜上病毒受体相结合,跨膜的亚基(如HIV的gp41)介导病毒膜与靶细胞膜进行融合。因此可以据此来设计抑制剂,阻止包膜糖蛋白的进一步折叠,抑制病毒的入侵,为病毒性疾病的预防和治疗提供新的思路和策略。HIV是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒,靶细胞是CD4阳性T淋巴细胞。HIV能够特征性地引起CD4阳性T淋巴细胞逐渐减少和免疫缺陷,最后导致获得性免疫缺陷综合征即艾滋病。艾滋病能够引起机会性感染并最终导致死亡。病毒与宿主免疫细胞的相互作用是影响疾病发展的关键因素。在HIV感染导致的AIDS疾病进展过程中,T细胞活化是一把双刃剑。CD4阳性T淋巴细胞的活化在清除病毒的过程中是非常关键的,成熟的CD4阳性T淋巴细胞是宿主抗病毒免疫的关键因素。HIV包膜蛋白gp120能够结合CD4阳性T淋巴细胞受体,进入细胞后进行复制,由于病毒颗粒的持续表达,CD4阳性T淋巴细胞增殖增加。CD4阳性T淋巴细胞活化后又可借助自身表达的凋亡受体,使已发生增殖的CD4阳性T淋巴细胞发生自身凋亡。因此,适度的CD4阳性T淋巴细胞活化可能作为HIV治疗的一种方法和策略。有文献报道从人血液透析液中分离的小分子多肽及其衍生物能够与HIV的融合多肽特异性结合并抑制HIV包膜蛋白介导的病毒进入过程。融合多肽作为HIV的组成多肽除了与病毒进入密切相关,还能够直接影响免疫细胞如CD4阳性T淋巴细胞的活化。目的:比较天然活性产物淫羊藿素与经典免疫抑制剂环孢素A对T细胞亚群的影响。观察常用丝裂原ConA对CD4+CD25+调节性T细胞抑制功能的影响与早期活化标志CD69之间的关系。研究HIV病毒包膜蛋白gp41的融合多肽对非抗原特异性和抗原特异性调节性T细胞的影响。方法:无菌分离出小鼠脾脏,红细胞裂解液裂解细胞,标记好CFSE染料的细胞3×105每孔种植于96孔板中,研究OVA的T细胞增殖以及药物淫羊藿素Icaritin的作用,流式细胞仪检测。细胞采用直接免疫荧光标记法对每组细胞进行染色,分析药物淫羊藿素Icaritin对CD4阳性T细胞表面标志IL-2受体CD25的表达。研究CD4阳性T细胞表面标志IL-2受体CD25的表达以及药物淫羊藿素Icaritin的作用,流式细胞仪检测。ELISA检测IL-2的分泌。用免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞、CD4+CD25-效应性T细胞,加入不同浓度的ConA,12h后收集细胞,流式细胞分析其CD69的表达。CFSE标记CD4+CD25-效应性T细胞,按2:1比例与CD4+CD25+调节性T细胞共同培养,培养同时加ConA,3d后流式细胞仪分析ConA对CD4+CD25+调节性T细胞抑制CD4+CD25-效应性T细胞增殖的影响。流式细胞仪检测HIV病毒包膜蛋白gp41的融合多肽FP对ConA及PDB刺激的非抗原特异性和OVA抗原刺激的抗原特异性调节性T细胞的早期活化表面分子标志CD69的影响。结果:通过流式细胞仪检测发现淫羊藿素能抑制小鼠T细胞增殖和CD4阳性T细胞增殖。淫羊藿素能抑制CD4阳性T细胞IL-2受体CD25的表达,同时也能抑制T细胞分泌IL-2。通过ConA能剂量依赖性地升高CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞CD69的表达,对两群细胞CD69的升高表现出了相似的作用:另外,ConA在上述浓度能剂量依赖激活CD4+CD25+调节性T细胞的抑制功能。HIV病毒包膜蛋白gp41的融合多肽FP升高OVA抗原刺激的抗原特异性调节性T细胞的早期活化表面分子标志CD69,对ConA及PDB刺激的非抗原特异性调节性T细胞的早期活化表面分子标志CD69则没有影响。结论:天然活性产物淫羊藿素具有免疫抑制功能。ConA在体外对CD4+CD25+调节性T细胞活化和功能具有促进作用。ConA能一定程度模拟抗原,因而可用于评价药物对调节性T细胞的活化和功能影响。HIV包膜蛋白gp41融合多肽FP不影响非抗原特异性调节性T细胞的功能,但是能够激活抗原特异性调节性T细胞抑制效应性T细胞的功能,有可能抑制机体对HIV病毒的抗原特异性免疫应答,从而达到HIV免疫逃逸的目的。