【研究背景和意义】：谷氨酸广泛的参与了生物体能量代谢及神经传导的过程。维持正常生理功能十分重要的氨基酸。谷氨酸在体内代谢功能的紊乱会引起多种疾病的发生。然而对其在体内产生的毒性的具体机制研究还不是很清楚。【研究目的】研究necrostatin-1与受体相互作用蛋白激酶1（receptorinteraction protein kinase1,RIP1）及受体相互作用蛋白激酶3（receptor interactionprotein kinase3,RIP3）在谷氨酸诱导的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）与海马神经元（HT22）毒性中发挥的作用。【研究方法】在用谷氨酸或TNF-诱导后，检测野生型及RIP3缺失型小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）以及HT22细胞的存活率，以探明它们对谷氨酸或TNF-的敏感度。通过siRNA干扰将TNF-诱导的坏死通路中的关键蛋白RIP1沉默，或通过药物necrostatin-1预处理，后加入谷氨酸或TNF-诱导，观察RIP1的下调与necrostatin-1预处理对谷氨酸或TNF-诱导的细胞死亡的影响是否一致。并用western blot检测其siRNA的干扰效率。利用RIP3缺失的MEF细胞，以及通过用siRNA干扰降低RIP3表达的HT22细胞，检测RIP3的缺失或下调对谷氨酸或TNF-诱导的细胞死亡的影响，以判断TNF-诱导坏死的关键蛋白RIP3是否参与谷氨酸诱导的细胞死亡信号通路。通过siRNA干扰的方法下调线粒体蛋白凋亡诱导因子（apoptosis inducing factor，AIF）的表达，以判断AIF在谷氨酸或TNF-诱导的细胞死亡中的作用；通过使用自噬及溶酶体的化学抑制剂balfilomycin-A1(BFA)，Chloroquine (CQ)，3-Methyladenine(3-MA)以及活性氧ROS的化学抑制剂butylated hydroxyanisole (BHA)，N-acetylcysteine (NAC)以判断谷氨酸或TNF-诱导的细胞死亡与自噬或溶酶体及活性氧的关系。【研究结果】1）在HT22和MEF细胞中，necrostatin-1都能够有效阻止谷氨酸诱导的细胞死亡,而且凋亡抑制蛋白z-VAD能促进此细胞死亡。2）在MEF和HT22细胞中，利用RNAi沉默necrostatin-1的靶蛋白RIP1能够抑制肿瘤坏死因子TNF-诱导的细胞坏死，但不影响谷氨酸诱导的细胞毒性。3）与RIP1相互作用的细胞坏死调控蛋白RIP3的敲除不能抑制谷氨酸诱导的MEF细胞死亡，但能完全阻止TNF-诱导的细胞坏死，而且，RIP3的RNAi不能抑制谷氨酸诱导的HT22细胞死亡。4）线粒体凋亡诱导因子AIF的沉默不能阻止谷氨酸诱导的HT22细胞死亡以及MEF细胞死亡。5）自噬/溶酶体抑制剂BFA和3-MA等能有效阻止谷氨酸诱导的细胞死亡，但不影响TNF-诱导的细胞坏死。6）活性氧抑制剂BHA和NAC能抑制谷氨酸以及TNF-诱导的细胞坏死。【结论】综上所述，这些结果不仅首次证实了necrostatin-1阻止谷氨酸诱导的细胞死亡的靶点并不是RIP1，同时也提出，谷氨酸诱导的细胞死亡并不依赖于TNF诱导的细胞坏死下游的RIP1，RIP3。另外也进一步揭示其与溶酶体自噬泡的关系，并且活性氧也可能参与其下游损伤机制。