抗生素帕克素发酵条件的优化和合成相关基因的初步研究

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致病杆菌是是寄生于昆虫病原线虫肠道内的一类细菌,它能产生多种抗菌活性物质,这些物质具有抑菌、杀虫、杀线虫、抗溃疡、抗肿瘤和抗病毒等活性,因此致病杆菌将会成为一类具有非常大的开发潜力和应用前景的生物资源,在医疗卫生和农业上发挥重要的作用。本研究以嗜线虫致病杆菌北京变种CB6菌株(简称CB6菌株)为研究对象,对其代谢产物帕克素的发酵条件和基因进行了初步的研究,主要结果如下: 1.在帕克素发酵培养基的基础上,对其碳源,氮源和无机盐重新进行了筛选,筛得最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为胰蛋白陈,最佳微量元素为磷酸二氢钾。并且利用二次正交旋转组合设计法对CB6菌株的发酵培养基进行了优化组合,优化后的发酵培养基组成为:胰蛋白胨6%、蔗糖4%、氯化钠0.5%、磷酸二氢钾0.038%。培养基优化后帕克素的产量从初始的146ug/ml提高至262ug/ml,提高了79.5%。 2.对CB6菌株发酵帕克素的摇瓶发酵条件进行了优化,结果表明,最佳摇瓶发酵条件为:pH6.5、装液量75mL/500mL摇瓶、摇床转速180r/min、温度28℃、接种量7%。在优化后的发酵培养基和发酵条件下,采用管碟法计算得到帕克素的产量从初始的146ug/ml提高至312ug/ml,提高了113.7%。 3.测定了帕克素标准品对番茄疫霉的防治效果,离体生测测得帕克素对番茄疫霉的EC50(半致死浓度)是0.28μg/ml。活体生测测得当帕克素浓度大于或等于4ug/mL时,能抑制番茄疫霉的发病。 4.采用重叠延伸引物PCR法扩增了CB6菌株Xna基因的同源重组全长片段,并将该片段连接到自杀性载体pJQ200上,利用二亲本结合转移法成功转入CB6菌体中,并对转化效率进行了优化,结果表明:供体菌S17-1和受体菌CB6菌株的比例为2,结合时间为8小时时,转化效率最高,达到1.08×10-4。
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