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丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)呈全球分布，自然感染率约为3％，即有1.7～2.0亿人为丙型肝炎感染者。近年来，HCV在部分地区的流行呈增长态势，我国的HCV估计感染率为2.5-4.9％，感染总人数超过5000万人。HCV一经感染，大部分感染者将发展成慢性丙型肝炎，并有较大比例的感染者最终发展成肝硬化、肝癌。由于缺乏可以治愈的药物和疫苗，对丙型肝炎尚不能有效的治疗与预防，丙型肝炎已经成为继艾滋病之后的又一大严重危害人类健康的传染病。由于HCV的依赖RNA的RNA聚合酶(RdRp)缺乏校对功能，导致HCV基因突变频率极高。根据HCV基因组核苷酸序列的同源性，HCV可被分为6个基因型，70多个亚型，以及众多的准种。HCV基因型分布呈现明显的区域差异；丙型肝炎患者的临床症状、病程进展，及药物治疗效果均与基因型密切相关。HCV基因型的研究有助于明确HCV流行的危险因素与传播途径，了解病毒的变异、进化特点，并为地方性疫苗的研制，药物的研究与开发，患者临床观察与治疗措施的制定提供流行病学依据。对HCV感染的早期诊断是控制HCV传播的重要手段，其中HCV核心抗原的检测对处于HCV感染“窗口期”的个体检测有很大价值。本研究经对采自云南省昆明市42例非吸毒所致丙型肝炎患者样品，和14例静脉吸毒所致HCV／HIV共感染者的样品，进行了血浆病毒核酸提取，HCV 5’NCR-C区基因的核苷酸序列测定与分析。发现：1．本研究建立的基于5’NCR-C区的基因分型方法可以将所有待测样本有效分型，弥补了5’NCR区在基因分型方法不能区分1型和6型固有缺陷。2．昆明市非静脉吸毒所致丙型肝炎病人中，1b亚型仍为主要流行型，其次为3型，2a亚型也有一定比例的流行，同时发现有6k和6n亚型，这与HCV在我国其它省份普通人群中1b／2a为主的基因型分布明显不同。3．昆明市静脉吸毒人群中HCV感染者中以1b和3为主，同时发现有6n，没有发现2a亚型，此种HCV基因型分布特点与东南亚国家更为相似。4．本研究中普通人群1b型的组成更为复杂，可被分为五个组，6例静脉吸毒1b型样品则全部归入第二个组中，证明昆明市普通人群HCV传入呈多途径方式，但对静脉吸毒人群则以单途径方式传入。5．HCV C区HLAA2型CTL抗原表位在1b与3b型之间有明显差异，可能是1b亚型易于慢性感染并快速致病原因之一。6．丙型肝炎病程与ALT、AST等肝功生化指标之间无显著相关性，不同基因型间ALT、AST水平无明显差异，但1b型患者HCV病毒载量显著高于其它基因型患者，与AST，ALT等肝功生化指标相比较，HCV病毒载量更适合作为丙型肝炎病程评价指标。对丙型肝炎早期诊断是控制HCV传播的重要手段，其中基于HCV核心蛋白及相关抗体反应的检测方法对HCV感染者“窗口期”诊断有很大价值，Core蛋白表达是建立此方法的核心步骤。本研究将HCV Core基因扩增产物克隆到pET 100／D-TopoVector，在BL21Chemically Competent Ecoli中表达，进而用SDS-PAGE电泳检测，发现：经克隆获得了正确的Core基因，并可诱导表达出预期大小的蛋白分子(约23KD)，在诱导培养2.5小时，可获得最大表达量。综上所述，本研究对云南省昆明市丙型肝炎患者的HCV基因型分布进行了较为系统的研究，所取得结果将有助于明确云南省HCV分子流行病学特点、追溯HCV病毒传播来源，分析HCV病毒进化特点，同时为我省丙型肝炎患者病人临床诊断与治疗，及进行药物研发合地方性疫苗研制提供前期研究基础。HCV Core蛋白表达构建将为研制高特异性和敏感性的HCV抗体诊断试剂奠定基础。