转SoDREB2烟草抗旱性及甘蔗转SoDREB2研究

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甘蔗是食糖生产的主要原材料,由于近年来的天气变化极端,甘蔗生长发育受到极大的危害,干旱的危害尤为严重,造成大量减产,因而选育出高抗旱性新品种迫在眉睫。传统的育种手段由于周期长,进度较为缓慢,已经不能满足现代农业育种的要求,而利用基因工程手段使外源基因导入甘蔗中,培育出高抗性的新品种,逐步建立起一套完整快捷的体系,有效提高了甘蔗新品种选育效率。本实验以甘蔗中克隆得到的SoDREB2基因,鉴定了该基因的功能以及在烟草中的遗传稳定性,同时进行了甘蔗的遗传转化研究,本实验以主要结果如下:1.对转SoDREB2基因烟草的T1代进行鉴定,检测结果显示:T1代正义转基因烟草检出率为73.33%,反义转基因烟草检出率为65.56%,说明转基因烟草经过T1代遗传,有近1/3出现性状分离或丢失,其中正义转基因烟草比反义转基因烟草稳定。同时经检测结果表明SoDREB2基因在烟草中表达上调,并符合孟德尔遗传定律。2.对苗期进行土壤干旱胁迫处理,测定生理生化指标。包括细胞膜透性、叶绿素含量、脯氨酸含量(Pro)、丙二醛含量(MDA),以及酶活性测定,包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT),烟草抗旱性表现为正义转基因烟草>对照野生型烟草>反义转基因烟草。进一步验证甘蔗SoDREB2基因对提高植株抗旱性起到正向调节作用。3.对诱导甘蔗胚性愈伤组织培养技术进行了优化。实验采用甘蔗生长最旺盛时期—生长期的心叶为外植体,用75%酒精进行表面消毒后,分别采用MS和N6两种不同培养基诱导愈伤组织,MS愈伤组织诱导率为55%,N6培养基愈伤组织诱导率为62%。4.以由新台糖22号新叶为原材料诱导出的Ⅱ型胚性愈伤为受体材料,EH105为转化的农杆菌菌株,载体为PBI121,利用农杆菌介导转化法,将从甘蔗中克隆得到的SoDREB2基因利用农杆菌介导至甘蔗品种新台糖22中,经过抗生素G418筛选后,对目的基因和标记基因分别进行PCR检测,有2株ROC22初步确认导入正义SoDREB2基因,转化率为14.2%。
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