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目的采用有机化学固相合成Fmoc法合成高纯度RNAⅢ抑制肽（RNAⅢ-inhibiting peptide，RIP）；体外、体内实验验证RIP抑制葡萄球菌感染和生物被膜形成的能力；体外实验研究RIP抑制葡萄球菌在骨科内植物表面粘附及形成生物被膜的能力；体内动物实验验证RIP治疗骨科内植物（人工关节假体）葡萄球菌感染的可行性。方法1、RIP的合成、提纯与鉴定：根据已知的氧基酸序列，采用固相合成Fmoc法合成RIP粗品，利用反相高效液相色谱法对RIP粗品进行纯化，对纯化后的RIP肽进行质谱分析、氨基酸组成分析、氨基酸序列分析、红外光谱分析及蛋白活性鉴定。2、体外、体内验证RIP防治葡萄球菌感染和抑制生物被膜形成的效果：RIP在体外对金葡菌毒素（肠毒素和溶血素）产生的影响；应用荧光显微镜观察RIP体外对表皮葡萄球菌在Hela细胞表面粘附能力的影响；将RIP与表皮葡萄球菌ATCC12228和ATCC35984菌株共同培养，观测RIP对表皮葡萄球菌胞外粘质物（ESS）产生的影响；通过RIP与抗生素联合用药后生物被膜内活菌计数的比较研究RIP与抗生素之间的协同作用。建立大鼠皮下囊内植物金黄色葡菌感染模型，植入分别经生理盐水、10mg／mlRIP、30mg／ml左氧氟沙星及混合药液浸泡20分钟的涤纶材料，缝合后向囊内注入0.5ml浓度为2×107cfu／ml的金葡菌RN6390B，术后观察各组大鼠生命体征变化和不同时间点的存活率，并进行涤纶材料表面生物被膜内活菌计数。3、RIP防治骨科内植物材料葡萄球菌感染和生物被膜形成的体外实验研究：将细菌ATCC35984用FITC标记后与骨科常用生物材料：钛合金、钴铬钼合金、高分子聚乙烯（每种材料有光滑和粗糙两种不同的表面）共同培养，荧光显微镜观察细菌对不同材料表面的粘附情况及RIP对细菌粘附能力的影响；应用扫描电镜（SEM）和激光共聚焦显微镜（CLSM）观察RIP体外对骨科内植物材料表面表皮葡萄球菌生物被膜形态学的影响；最后，通过SYT09（活菌）和PI（死菌）双染色，对RIP的作用机理进行初步探讨。4、RIP防治家兔人工膝关节置换假体葡萄球菌感染的实验研究：以家兔为对象建立全新的人工膝关节置换模型，向术后关节内接种表皮葡萄球菌ATCC35984，并同时注入RIP或抗生素，制造关节假体感染模型，以术后动物全身情况、体温体重变化、WBC、CRP、血清铜锌比、关节感染程度、假体表面生物被膜细菌计数为观测指标，从多个角度观察RIP对关节假体葡萄球菌感染的防治效果。结果1、RIP的合成、提纯和鉴定：采用固相合成Fmoc法可以合成得到稳定的RIP肽，经反相高效液相色谱法纯化可得到纯度为97.42％的多肽，质谱分析显示合成多肽的分子量为914.37，与RIP理论上的分子量基本一致的；氨基酸组成分析显示RIP由表酪氨酸（Y）、丝氨酸（S）、脯氨酸（P）、色氨酸（W）、苏氨酸（T）、门冬酰胺／氨酸（N）和苯丙氨酸（F）七种氨基酸组成，其比例依次为0.995：0.950：0.996：0.382（酸水解破坏）：0.987：1.019：1.00；氨基酸序列分析显示上述氨基酸的排列顺序为YS-P-W-T-N-F，与RIP的分子式完全吻合；傅立叶红外光谱分析检测到NH键和CN键的伸缩震荡，该蛋白含有与RAP共有的-NH2末端结构；蛋白活性分析显示RIP可以有效抑制菌液中RNAⅢ的产生，具有很强的生物活性。2、RIP在体外、体内均可有效防治葡萄球菌感染和抑制生物被膜形成：RIP在体外可有效抑制金葡菌肠毒素B和溶血素的产生；RIP体外可以明显减少表皮葡萄球菌对Hela细胞的粘附；RIP可减少葡萄球菌生物被膜形成过程中胞外粘质物（ESS）的分泌；RIP与左氧氟沙星联用具有协同作用；RIP与左氧氟沙星联用可有效防治大鼠皮下囊涤纶内植物葡萄球菌感染。3、RIP在体外可有效防治骨科内植物材料葡萄球菌感染和生物被膜形成：表皮葡萄球菌对不同骨科生物材料的粘附能力存在差别：粗糙超高分子聚乙烯＞光滑超高分子聚乙烯＞粗糙钴铬钼合金＞粗糙钛合金＞光滑钴铬钼合金＞光滑钛合金；RIP可有效减少表皮葡萄球菌在上述材料表面的粘附和生物被膜形成；荧光双染色实验结果显示RIP本身没有明显的杀菌作用，但对抗生素有明显的增效协同作用。4、RIP防治骨科人工膝关节置换模型假体葡萄球菌感染的实验研究：RIP与抗生素联用组体温、体重变化、WBC及CRP水平、关节炎症程度均优于其余各组，单用RIP的效果与左氧氟沙星相当，两者联合应用可有效防治骨科关节假体葡萄球菌感染。结论1、我们在国内首次通过固相合成Fmoc法和反相高效液相色谱法合成得到高纯的RIP肽，合成得到的RIP具有与天然RIP相同的结构和功效。2、在体外，RIP可以有效抑制金葡菌毒素的产生，减少表皮葡萄球菌对骨科生物材料及Hela细胞表面的粘附，减少ESS的产生，抑制葡萄球菌在骨科内植物材料表面形成生物被膜。3、在体内，RIP可以有效防治内植物，尤其是人工关节假体，发生的葡萄球菌感染，抑制内植物／假体表面生物被膜的形成。4、RIP通过干预葡萄球菌QS系统的信号传导而抑制葡萄球菌感染和生物被膜形成，为细菌感染的防治开创了一条全新的思路。