SDF2L1在鼻咽癌中的表达及其对鼻咽癌细胞生物学功能的影响

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:simyhu
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目的:鼻咽癌在我国广东和广西发病率高,其起病隐蔽、恶性程度高、易发生转移,严重威胁到了患者的身体健康。近几年来,大量研究发现抑癌基因的失活是鼻咽癌发生、发展的重要因素。研究发现基质细胞衍生因子2样1(Stromal cell derived factor2like1,SDF2L1)的表达下调与肿瘤的发生、预后有关。本研究主要探讨SDF2L1在鼻咽癌中的表达情况以及对鼻咽癌细胞生物学功能的影响。  方法:1、应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和免疫组化方法来检测鼻咽癌组织和鼻咽粘膜慢性炎组织中SDF2L1mRNA和蛋白的表达水平,并分析其与临床病理特征的关系。2、应用qRT-PCR和蛋白印迹法(Western blotting,WB)检测人永生化鼻咽上皮NP69细胞和鼻咽癌CNE1、CNE2Z细胞中SDF2L1mRNA和蛋白的表达水平。3、利用慢病毒载体介导的RNA干扰技术,分别转染CNE1细胞并经嘌呤霉素筛选,其中转有针对SDF2L1干扰片段的细胞为实验组,转有空载片段的细胞为空载组,未转染的CNE1细胞为对照组,并用WB检测各组SDF2L1蛋白的表达水平。4.采用MTT实验和细胞克隆形成实验来评价沉默SDF2L1对CNE1细胞增殖能力的影响。5、应用细胞划痕、Transwell迁移、Transwell侵袭实验来检测SDF2L1表达沉默对CNE1细胞迁移、侵袭能力的影响。6、应用qRT-PCR检测各组细胞中E一钙粘蛋白、N一钙粘蛋白及基质金属蛋白酶-9的mRNA相对表达量。  结果:1、12例鼻咽癌组织和12例鼻咽粘膜慢性炎组织中SDF2L1mRNA的相对表达量分别为0.549±0.568,1.254±0.729。相对于鼻咽粘膜慢性炎组织,鼻咽癌组织中SDF2L1mRNA的相对表达量明显降低,两者比较差别有统计学意义(P<0.05)。SDF2L1蛋白在鼻咽癌组织中表达的阳性率为20.6%(20/97),明显低于其在鼻咽粘膜慢性炎组织中表达的阳性率91.4%(53/58),差异有统计学意义(P<0.05)。SDF2L1蛋白在鼻咽癌组织中的表达与临床病理参数无明显相关(P>0.05)。2、SDF2L1mRNA在NP69、CNE1、CNE2Z细胞中的相对表达量分别为1.006±0.137、0.638±0.048、0.287±0.016;蛋白在NP69、CNE1、CNE2Z细胞中的相对表达量分别为0.980±0.019、0.932±0.025、0.517±0.036,鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞中SDF2L1mRNA和蛋白水平表达均明显低于NP69,差异有统计学意义(P均<0.05)。3、SDF2L1蛋白在实验组、空载组、对照组中的相对表达量分别为0.280±0.039、0.935±0.034、0.926±0.031,实验组中SDF2L1蛋白水平表达均明显低于空载组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。4、MTT实验显示,实验组、空载组、对照组细胞培养96h的OD值分别为1.135±0.013、1.149±0.021、1.127±0.019,各组细胞增殖能力无明显差异,结果无统计学意义(P>0.05)。细胞克隆形成实验中,实验组、空载组、对照组的细胞克隆形成率分别为(60.4±6.39)%、(58.67±5.75)%、(59.41±5.02)%,三组比较无明显差异,结果无统计学意义(P>0.05)。5、细胞划痕实验中,实验组、空载组、对照组中细胞相对迁移率为(72.79±0.96)%、(53.06±0.74)%、(52.38±0.65)%,实验组中细胞相对迁移率明显高于空载组和对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。Transwell迁移实验中,实验组、空载组、对照组穿入下室的细胞数分别为331±7、254±13、242±9个,实验组穿入下室的细胞数均明显高于空载组和对照组,差别有统计学意义(P均<0.05)。Transwell侵袭实验中,实验组、空载组、对照组穿入下室的细胞数分别为221±10、140±9、146±7个,实验组穿入下室的细胞数均明显高于空载组和对照组,结果有统计学意义(P均<0.05)。6、与空载组、对照组相比,实验组中的E一钙粘蛋白mRNA相对表达量显著降低(P均<0.05),基质金属蛋白酶-9mRNA相对表达量明显升高(P均<0.05),而N一钙粘蛋白mRNA相对表达量无明显改变(P>0.05)。  结论:1、SDF2L1mRNA和蛋白水平在鼻咽癌组织及细胞中的表达下调,与鼻咽癌的临床病理特征无明显的相关。2、成功建立了SDF2L1表达沉默的鼻咽癌CNE1细胞株。3、SDF2L1表达沉默可促进鼻咽癌细胞的迁移和侵袭,而对鼻咽癌细胞的增殖能力无明显影响。4、鼻咽癌细胞株SDF2L1低表达导致与EMT有关的E-钙粘蛋白及基质金属蛋白酶-9表达改变,提示SDF2L1表达下调可能是鼻咽癌发生浸润、远处转移的分子标志物,可能参与了鼻咽癌的发生、发展。
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