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葛(Pueraria lobata(Willd.)Ohwi),别名葛藤、粉葛、干葛、葛麻藤等,为豆科多年生草质藤本植物,其根、茎、叶、花均可入药,是传统的中药材,其根富含葛根素、多糖等多种活性成分,具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻、抗氧化等多种功效。早期研究中,多糖类常作为能源物质,随着细胞生物学、分子生物学研究技术手段的进步,人们对多糖的认识逐渐深入。研究报道,多糖可作为广谱免疫促进剂,具有抗氧化、增强免疫力、抗肿瘤、抗病毒、抗炎和降血糖等多种生物学活性,近年来人们对多糖的研究更加关注。内生菌是寄生在健康植物组织内或与之共生的、不引起宿主明显病害的一类微生物。据报道内生菌可以合成与宿主植物相同或相似活性成分的代谢产物,本实验室前期从葛中分离出的一株内生菌J29-1(Penicilliumsp.RPS29),其菌丝体和发酵液均有一定的抗氧化活性,且含有一定量的多糖。本文在前期研究的基础上,考察了葛内生菌J29-1(Penicilliuwsp.RPS29)中粗多糖(PSP)的提取工艺、分离纯化过程、单糖组成、重均相对分子量及体外抗氧化活性,以期为葛内生菌多糖的后续开发利用提供理论和技术支持。研究主要取得了以下结果:1、采用热水浸提、乙醇沉淀的方法提取了葛内生菌J29-1粗多糖(PSP),并利用Box-Behnken对提取工艺进行了响应面优化分析(Response Surface Methodology,RSM)。确定了 PSP提取的最佳条件为:提取时间2.5h,提取温度80.83℃,液料比30:1,PSP提取率的预期值为12.90%。考虑到实际操作情况,将提取温度设为80.0℃,提取时间和液料比不变,在此实验条件下,PSP得率达到12.89±0.15%,与预期得率接近。2、水提醇沉所得的葛内生菌多糖PSP,经Sevag法除蛋白,活性炭脱色、透析除盐除杂,DEAE-52纤维素柱层析、G-100葡聚糖凝胶柱层析分离纯化,得到两个均一组分多糖,分别命名为PSP-1*和PSP-2*。3、PSP-1*和PSP-2*经TFA酸解后进行PMP柱前衍生化,HPLC-UV分析发现,PSP-1*由 D-核糖(D-ribose)、L-鼠李糖(L-rhamnose)、D-木糖(D-xylose)、L-阿拉伯糖(L-arabinose)组成,摩尔百分比分别为29.83%:35.61%:23.11%:11.45%;PSP-2*由D-核糖(D-ribose)、L-鼠李糖(L-rhamnose)、D-葡萄糖(D-glucose)、D-木糖(D-xylose)组成,摩尔百分比分别为 26.30%:28.59%:35.13%:9.98%。高效液相色谱法测得PSP-1*和PSP-2*的重均相对分子质量分别为 2.77×104Da 和 5.38×103Da。4、通过DPPH、ABTS、·OH、O2·自由基体系、Fe2+螯合体系,较为系统地评价了葛内生菌多糖PSP-1*和PSP-2*的体外抗氧化活性,结果显示,PSP-1*和PSP-2*均具有一定的抗氧化能力,具有成为天然抗氧化剂原料的潜在能力。