Toll样受体(Toll like receptors TLRs)是哺乳动物具备的天然免疫分子,属于模式识别受体(pattern recognition receptor PRR),在识别和抵御各种病原微生物感染中发挥着着重要作用。1997年以来,在哺乳动物体内相继发现了13种Toll样受体(TLR1-TLR13),人体内目前发现有10种Toll样受体(hTLR1-hTLR10),皆属于工型跨膜受体。TLR-9是典型的Toll家族成员,细菌DNA中含有的CpG序列是TLR-9目前唯一明确识别的病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns PAMPs)。CpG序列即以非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)为核心的回文序列,该序列在脊椎动物基因组的出现频率大大低于在原核生物、病毒基因组的出现频率,且CG多发生甲基化。脊椎动物免疫系统正是通过识别CpG特征结构来识别微生物DNA并产生针对抗原的保护性免疫反应。目前关于CpG序列如何在抗过敏反应,抗肿瘤反应中,抗自身免疫反应中发挥作用已成为基础及临床医学研究中的热点。作为CpG序列在体内的唯一受体,自发现以来也受到了研究者的关注。 尽管许多实验已证实TLR-9可以介导CpG激活多种免疫细胞,但是关于TLR-9蛋白的特征,如何与CpG结合并介导后续免疫反应目前仍有许多未知需要进一步研究。本研究拟对人TLR-9(hTLR-9)进行克隆、表达并制备其相关的多克隆抗体。同时构建转染有hTLR-9基因的HEK293细胞模型,这也达到了对hTLR-9进行真核表达的目的。在此基础上,拟利用转染的细胞作为免疫原,以原核表达的hTLR-9 N-末端作为筛选抗原,制备相应的抗hTLR-9 N—末端的单克隆抗体。本实验结果获得了抗hTLR-2单、多克隆抗体,构建成功稳定转染有hTLR-9基因的HEK293细胞模型,为进一步研究hTLR-9-CpG系统提供了重要的制剂。