【摘 要】
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目的:本研究的目的是为了探讨MiRNA-301b-3p在急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）中对凋亡和增殖的影响及其潜在的分子机制。方法:1.通过qRT-PCR技术检测miRNA-301b-3p在AML几种不同细胞株中的表达水平。2.分别将miRNA-301b-3p mimic和miRNA-301b-3p inhibitor转染到THP-1和KG-1a细胞中,上调
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目的:本研究的目的是为了探讨MiRNA-301b-3p在急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）中对凋亡和增殖的影响及其潜在的分子机制。方法:1.通过qRT-PCR技术检测miRNA-301b-3p在AML几种不同细胞株中的表达水平。2.分别将miRNA-301b-3p mimic和miRNA-301b-3p inhibitor转染到THP-1和KG-1a细胞中,上调或敲低miRNA-301b-3p在这两个细胞株中的表达水平。运用CCK8和细胞计数检测转染后细胞增殖能力的变化。随后运用WB试验检测转染后凋亡相关蛋白（Cleaved PARP、Bcl-2、Bax）表达水平的变化,流式细胞术被用于进一步验证细胞凋亡的变化趋势。3.借助生物信息学在线软件Target Scan 7.2和Starbase V3,确定miRNA-301b-3p的假定靶点及结合位点。构建携带有miRNA-301b-3p和下游靶m RNA FOXF2的结合位点的野生型质粒（FOXF2-3′UTRWT）和对其结合位点进行了突变的突变型质粒（FOXF2-3′UTRMUT）,分别与miRNA-301b-3p mimic及mimic NC共转染293T细胞。采用双荧光素酶报告基因试验验证两者之间的直接结合关系。通过qRT-PCR和WB试验检测miRNA-301b-3p水平变化对其靶点FOXF2的影响,以及对下游Wnt/β-catenin信号通路的影响。4.通过qRT-PCR和WB法评估AML细胞株中FOXF2的表达。用过表达FOXF2的质粒（pc DNA-FOXF2）转染THP1细胞,运用CCK8测定FOXF2表达上调对细胞增殖的影响,与此同时用流式细胞术和免疫印迹法检测凋亡的变化。5.在上调miRNA-301b-3p的THP1细胞中转染FOXF2过表达质粒（pc DNA-FOXF2）,通过WB检测凋亡相关蛋白的表达,CCK8检测对细胞增殖能力的影响,并运用qRT-PCR和WB检测Wnt/β-catenin信号通路相关靶基因的表达。结果:1.miRNA-301b-3p在AML各细胞系中表达上调。2.CCK8和细胞计数测定表明,敲低miRNA-301b-3p会使THP1和KG1a细胞的增殖受到抑制,而上调miRNA-301b-3p则促进细胞增殖。流式细胞术和WB试验测定表明,miRNA-301b-3p上调可以抑制细胞凋亡,而其下调具有相反的效果。3.QRT-PCR和WB结果证明上调miRNA-301b-3p抑制FOXF2的表达,敲低则促进。经过Target Scan 7.2和Starbase V3.0分析和双荧光素酶试验的验证,FOXF2和miRNA-301b-3p之间被证明存在相互结合作用。4.CCK8、免疫印迹试验和流式细胞术实验结果证明过表达FOXF2抑制THP1细胞增殖,促进凋亡。5.QRT-PCR和WB结果证明miRNA-301b-3p正向调控Wnt/β-catenin信号通路相关靶基因的表达。6.CCK8、qRT-PCR和WB结果证明过表达FOXF2可在一定程度上逆转上调miRNA-301b-3p表达后对THP1细胞增殖凋亡及Wnt/β-catenin信号通路相关靶基因表达的影响。结论:1.miRNA-301b-3p水平在AML细胞中显著升高。miRNA-301b-3p的下调抑制了AML细胞的增殖,并反过来促进其凋亡。2.FOXF2在AML细胞中发挥抑癌作用。3.MiRNA-301b靶向FOXF2来调节Wnt/β-catenin信号通路。4.在拯救实验中,FOXF2过表达部分逆转了miRNA-301b-3p在AML细胞中的作用。
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