【摘 要】
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目的:通过探索在低强度红外激光（波长632.8nm）光斑照射下,人结肠恶性肿瘤RKO细胞TRAIL-DR通路上TRAIL（人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体）、FADD（Fas相关死亡域蛋白）、c-FLIP（细胞FADD样白介素1转化酶抑制蛋白）等相关基因与蛋白的表达变化,探讨低强度激光是否通过TRAIL-DR通路促进人结肠恶性肿瘤RKO细胞凋亡;初步探求低强度激光这种治疗方法对人结肠恶性肿瘤RKO细
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目的:通过探索在低强度红外激光（波长632.8nm）光斑照射下,人结肠恶性肿瘤RKO细胞TRAIL-DR通路上TRAIL（人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体）、FADD（Fas相关死亡域蛋白）、c-FLIP（细胞FADD样白介素1转化酶抑制蛋白）等相关基因与蛋白的表达变化,探讨低强度激光是否通过TRAIL-DR通路促进人结肠恶性肿瘤RKO细胞凋亡;初步探求低强度激光这种治疗方法对人结肠恶性肿瘤RKO细胞凋亡的影响及其发生的影响的机制,为日后低强度激光这种治疗方法在人结肠恶性肿瘤的临床治疗实际应用上提供科研基础。方法:建立空白对照组和实验组模型,将细胞以一定密度种植在12孔板,培育5天,为空白对照组（con组:0J/cm~2）;从接种第二天开始,以不同强度低强度红外激光（波长632.8nm）连续照射三天,照射剂量分别为5J/cm~2组、10J/cm~2组、15J/cm~2组,建立低强度红外激光照射组模型,为实验组。建立好对照组及实验组后,以孔为单位,用Trizol提取12孔板中对照组及实验组每孔细胞的总RNA含量,采用RT-PCR实验方法检测并对比实验组和对照组TRAIL-DR通路上关键基因TRAIL,c-FILP,FADD表达的变化,采用Western-blot方法检测caspase 3蛋白水平的表达变化。结果通过RT-PRC实验方法检测并对比实验组和对照组TRAIL-DR通路上关键因子,结果提示在15J/cm~2的照射剂量下,RT-PCR检测TRAIL、FADD表达均明显上调（p<0.01）,且有随照射剂量的增加其表达水平也逐渐上调的趋势,差异有统计学意义。而在15J/cm~2的照射剂量下,在TRAIL-DR信号传导通路上起负性调节作用的c-FLIP表达明显下调（p<0.01）,且有随照射强度的增加其表达水平也逐渐下调的趋势,差异有统计学意义。通过Western-blot检测方法检验并对比实验组和对照组TRAIL-DR通路上caspase 3蛋白表达水平,结果提示在结果提示在15J/cm~2的照射剂量下,caspase 3蛋白表达水平明显增强（p<0.01）,且有随照射剂量的增加其表达水平也逐渐上调的趋势,差异有统计学意义。结论:综上,低强度红外激光（波长632.8nm）光斑照射对人结肠腺癌RKO细胞具有杀伤作用,其理论机制可能与低强度红外激光照射后人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、Fas相关死亡域蛋白等相关基因表达上调有关,以减慢人结肠腺癌RKO细胞的增殖速度。本实验可为临床上治疗结直肠恶性肿瘤提供一定新的理念和想法。
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