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桉树青枯病是由茄拉尔氏菌(Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi)引起的一种系统性维管束病害。为有效控制该病的传播,建立一种检测土壤中及桉树青枯病感病早期组织内的青枯菌的检测手段是十分必要的。本文应用了PCR、PCR-DGGE技术对土壤及组织中的桉树青枯病菌进行了分子检测。并对利用指示植物的方法检测土壤及组织内的桉树青枯菌进行了研究。主要研究结果如下:1土壤及潜伏期桉树组织内青枯菌的PCR检测为早期发现桉树幼苗和土壤是否带菌,本文利用PCR技术对桉树林地土壤及潜伏期桉树青枯菌的检测进行了研究。结果表明:利用OLI1、Y2引物进行PCR扩增,退火温度为55℃、59.0℃、63.8℃、66.2℃、68.6℃、70.9℃均能扩增出288 bp的特异性条带,通过比较显示,最佳退火温度为66.2℃。此外,煮沸法提取桉树青枯病菌DNA时,用下沉淀较近区域DNA溶液作为模板进行PCR比上层液作为模板效果好,且检测灵敏度较高。在PCR反应混合物中加入牛血清白蛋白(BSA)能明显提高扩增效率。通过SDS法与简单提取法提取土壤中青枯菌的DNA,PCR检测灵敏度均达2.5×10~4 CFU/g,简单提取法与SDS法相比具有快速、成本低廉等优点;CTAB法提取人工接菌的桉树组织中青枯菌,PCR后检测灵敏度达3×10~2 CFU/g。为制作桉树青枯病潜伏期材料,本试验分别利用浸泡法处理一年生桉树茎段与浸根法处理尾叶桉实生苗。结果显示,浸泡法第4 d开始发病,至第8 d发病率达100%,利用该数据得到了一种制备桉树青枯病潜伏期材料的方法,通过CTAB法提取潜伏期桉树青枯菌的DNA,利用OLI1和Y2引物进行PCR扩增后,检测出288 bp的条带。因此,PCR可以有效地检测土壤和潜伏期感病组织中桉树青枯病菌。2 DGGE检测桉树青枯病菌为了解不同地点青枯病菌是否有差别,利用DGGE区分大小相同而序列不同的DNA片段的特性,本试验对不同来源地的桉树青枯病菌进行PCR-DGGE检测与分析。结果显示,采自广东省湛江市的5株桉树青枯病2nd、3rd、4th、Rb、Rd与广西壮族自治区钦州市的3株桉树青枯病菌Z2、Z4、R020从DGGE图谱上比较没有明显差异。此外,本文还对桉树体内的内生细菌进行了PCR-DGGE研究,并且对利用DGGE检测桉树青枯病菌也进行了研究。结果表明,桉树体内多种内生细菌可以通过DGGE检测出来,而纯菌DNA经PCR-DGGE检测后,只出现一条主要条带。PCR反应体系中加入BSA后能明显提高DGGE检出条带的数量。通过对人工加入桉树组织中的桉树青枯菌进行DGGE检测的研究发现,桉树体内某些内生细菌与桉树青枯病菌具有相似的迁移位置。随着青枯菌浓度的增大,桉树体内有部分细菌条带消失。3利用指示植物检测桉树青枯病菌为利用成本低廉的指示植物检测土壤及桉树组织中的青枯菌,本试验对利用指示植物法检测桉树青枯菌进行了研究。通过对番茄、辣椒、茄子三种不同的桉树青枯病感病寄主的接种试验,筛选了辣椒、茄子作为检测桉树林地土壤及桉树组织内的青枯菌的指示植物。通过利用这两种指示植物检测土壤及桉树组织内的青枯菌的试验表明,无论是土壤或桉树组织内的桉树青枯菌,接入指示植物后发病期为截顶接种后的第4 d,第6 d的检测灵敏度可达104 CFU/mL。即当每株指示植物的接种菌体数为10个左右也可被成功检测出来。