长期服用降压类药物,对全身副作用大。选择合适的剂型和给药途径,使药物达到治疗效果的同时,减少药物的毒副作用,已成为广大患者的迫切需要。近年来刘洪臣提出了两种新的给药途径设计,即人工种植体全身给药系统和牙根管全身给药系统。通过这两种给药系统,将治疗局部或全身性疾病的药物经牙周膜或牙槽骨吸收达到全身,达到治疗疾病的目的。此设计需要了解牙周各组织,特别是牙槽骨组织对不同药物的转运能力。检索文献尚未见关于骨组织细胞转运降压类药物的报道,因此本实验作为人工种植牙全身给药系统实验研究的一部分,探讨了成骨细胞对硝苯地平和卡托普利的跨膜转运能力,为人工种植牙全身给药系统的可行性提供理论依据。本研究共分两个部分:第一部分成年大鼠牙槽骨成骨细胞的体外培养与鉴定目的:分离培养和鉴定SD成年大鼠牙槽骨来源的成骨细胞。方法:采用酶消化法和植块法相结合,分离培养SD大鼠牙槽骨来源的成骨细胞,同时常规方法诱导培养MC3T3-E1细胞。通过细胞形态学观察、碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色、茜素红染色和免疫组化法鉴定成骨细胞。结果:酶消化法和植块法相结合,可获得较高纯度和数量的成骨细胞。成骨细胞碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色、茜素红染、骨钙素免疫组织化学染色均呈阳性着色。结论:本试验采取酶消化法和植块法相结合,培养的成骨细胞及MC3T3-E1细胞具有正常成骨细胞生物学特性,可为进一步研究提供合适的实验对象。第二部分成年大鼠牙槽骨成骨细胞对硝苯地平和卡托普利转运目的:研究成年大鼠牙槽骨成骨细胞对硝苯地平和卡托普利转运的跨膜转运,并初步探讨药物浓度和药物孵育时间对药物转运量的影响,为人工种植体给药系统以及牙根管给药系统的设计提供实验依据。方法:将大鼠牙槽骨成骨细胞及MC3T3-E1细胞与含有药物(20ug/ml、100ug/ml的硝苯地平或30ug/ml卡托普利)的磷酸盐缓冲液(PBS)共同孵育1、3、5、10、15、20min后,收集各时间点细胞,用高效液相色谱法测定细胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量。用细胞内药物含量与细胞蛋白的比值作为观察药物转运量的检测指标。结果:1硝苯地平可以被成骨细胞及MC3T3-E1细胞转运至细胞内。(1)转运量与细胞种类有关。浓度相同时时,成骨细胞在各时间点的转运量明显均大于MC3T3-E1细胞的转运量(P＜0.01)。(2)转运量与药物浓度有关。药物浓度增高,转运量越大(P＜0.05)。(3)转运量与时间有关。2在上述给药浓度和时间点上,不能测出卡托普利在成骨细胞及MC3T3-E1细胞内的含量。结论:1大鼠牙槽骨来源成骨细胞及MC3T3-E1细胞可以跨膜转运硝苯地平。转运量与药物浓度、细胞种类、孵育时间有关。从而验证了人工种植牙全身给药系统的可行性,至于其转运机制目前还不十分清楚,有待于进一步深入研究。2本实验条件下不能检测出成骨细胞及MC3T3-E1细胞对卡托普利的跨膜转运,成骨细胞能否跨膜转运卡托普利还需还需采取其它方法验证。综上所述,本实验采取酶消化法和植块法相结合,成功分离培养了SD大鼠牙槽骨来源的成骨细胞,培养后的成骨细胞具有正常成骨细胞生物学性状和表现型,可为进一步研究提供合适的实验对象。本实验证明成骨细胞及MC3T3-E1细胞可以跨膜转运硝苯地平,转运量与药物浓度、孵育时间有关。从而验证了人工种植牙全身给药系统的可行性。在本实验条件下不能检测出成骨细胞及MC3T3-E1细胞对卡托普利的跨膜转运。至于成骨细胞能否跨膜转运卡托普利还需要进一步实验研究。