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研究背景和目的：乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)感染是导致肝脏疾病的主要原因。慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者可用核苷(酸)类似物进行治疗,伴随着长期用药会引起耐药性HBV变异,导致治疗的失败和疾病的进一步发展。近年来体内和体外研究发现,异芳基二氢嘧啶(HAP)类化合物是一种非核苷(酸)类的HBV复制高效抑制剂。与已知的抗HBV药物不同,HAP阻止病毒核心颗粒(也称核衣壳)的形成。在本研究中,我们对于HAP类化合物GH-1的体外抑制HBV复制的作用进行研究,探讨其抗病毒活性的作用机制,并检测阿德福韦(adefovir dipivoxil, ADV)耐药HBV变异株对GH-1的敏感性。方法：(1)不同浓度的GH-1和对照药物拉米夫定(lamivudine,3TC)与HepG2.2.15细胞共孵育,培养第8天,收集细胞和培养上清用于检测。以MTS方法测定GH-1对细胞的毒性作用并计算TC50(半数毒性浓度)。(2)以Southern blotting方法检测HBV复制中间体,建立量效曲线并计算GH-1的IC50(半数抑制浓度)。(3)以不同浓度GH-1和3TC处理HepG2.2.15细胞和用pHBcl-149质粒(含有HBV核心蛋白1-149位氨基酸,C末端标有flag标签)瞬时转染的HepG2细胞,以免疫印迹法分别检测HBV核心颗粒和核心蛋白。(4)表达纯化截短型HBV核心蛋白Cp149并形成HBV核心颗粒晶体。以动态光散射技术和电镜观测GH-1对核衣壳组装的影响。(5)GH-1处理以含有rtA181T/V和rtN236T诱变质粒瞬时转染的HepG2细胞,以Southern blotting方法检测HBV复制中间体,建立量效曲线并计算IC50。通过变异株和野生株IC50的比较,评价ADV耐药HBV变异株对GH-1的敏感性。结果：(1)GH-1和3TC的TC50分别为73.5μM和>100μM。(2)GH-1的IC50为0.01μM,对照组3TC为0.3μM。(3)在HepG2.2.15细胞中,随着GH-1浓度的增高,HBV核心颗粒的量减少,而高浓度3TC对照组(10μM),对HBV核心颗粒没有作用。在转染的HepG2细胞内,观察到相似的结果,HBV核心颗粒和核心蛋白的量均减少。(4)随着GH-1浓度的增加,溶液中聚合物粒径逐渐增大；视野中存在不规则的空泡状聚合物结构,随着作用浓度的升高,所形成的不规则结构逐渐增多,正确组装的病毒核衣壳颗粒逐渐减少,错误组装的颗粒聚合成为大块的聚集结构。(5)GH-1抑制ADV耐药变异株HBV DNA的复制,其抑制ADV耐药变异株的IC50与野生株一致,ADV耐药变异株对GH-1敏感。结论：GH-1抑制HBV复制,具有高效的抗病毒作用。GH-1作用于HBV核心蛋白,导致核心颗粒错误组装,提示该药物具有与核苷(酸)类似物药物不同的抗乙肝作用机制。GH-1对于ADV耐药HBV变异株具有与野生株同样的抑制作用。提示,GH-1可能作为单独或联合用药进行慢性乙型肝炎的临床治疗,具有良好的开发前景。