【摘 要】
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本研究运用植物细胞培养技术,分别对海南粗榧愈伤组织的诱导,愈伤组织增殖培养及抗褐变等方面进行研究,进一步为悬浮细胞培养体系的建立及其三尖杉酯碱次生代谢的调控提供实验基础。以海南粗榧（Cephalotaxus mannii Hk. f.）的枝条、叶为外植体材料进行愈伤组织诱导,采用升汞、次氯酸钠与臭氧为消毒剂,探讨了不同灭菌方法对海南粗榧外植体污染和细胞活性的影响,以降低海南粗榧在外植体消毒过程中的
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本研究运用植物细胞培养技术,分别对海南粗榧愈伤组织的诱导,愈伤组织增殖培养及抗褐变等方面进行研究,进一步为悬浮细胞培养体系的建立及其三尖杉酯碱次生代谢的调控提供实验基础。以海南粗榧（Cephalotaxus mannii Hk. f.）的枝条、叶为外植体材料进行愈伤组织诱导,采用升汞、次氯酸钠与臭氧为消毒剂,探讨了不同灭菌方法对海南粗榧外植体污染和细胞活性的影响,以降低海南粗榧在外植体消毒过程中的污染率。结果表明以升汞与臭氧复合处理的灭菌方法最佳,最佳灭菌条件为：采用75%酒精灭菌1min,然后臭氧灭菌30min,再用0.1%HgCl2溶液灭菌10min。在此灭菌条件下,外植体污染率5%,愈伤组织诱导率95%,外植体细胞活力比对照提高38%。并选取最佳灭菌条件以污染率为标准筛选出嫩叶为最适外植体材料。以海南粗榧愈伤组织为材料,通过测定愈伤组织的生长速率、PPO活性、POD活性和多酚含量,研究了抗褐变剂种类和浓度、激素种类和浓度、粗榧外植体对愈伤组织生长与褐变的影响。实验表明：添加0.5g·L-1PVP的培养基使愈伤组织在取得最大增长速率的同时有良好的抗褐变效果。以叶诱导出的愈伤组织褐变率比茎要低；最佳增殖培养基为MS+4mg·L-1NAA+0.1mg·L-1KT+30g·L-1蔗糖+6g·L-1卡拉胶+0.5g·L-1PVP。高效液相色谱检测条件为流动相：0.02mol/L;乙酸铵：甲醇=55：45；柱温：25℃；检测波长：288mm；进样量：10μL；流速：1.000mL/min。通过测定海南粗榧外植体提取物和愈伤组织发酵液提取物,发现提取物中均含有三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱。
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