论文部分内容阅读
黄曲霉毒素是一类主要由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的次级代谢产物,具有致癌、致畸、致细胞突变的作用,被联合国粮农组.织和世界卫生组织认定为I类致癌物质,严重影响人类健康。我国及其他世界各国粮油食品受黄曲霉毒素污染严重,经济损失巨大。曲霉毒素污染控制仍是世界性科学难题。研究发现β-葡聚糖能够抑制黄曲霉菌AFB1的合成,这为食品行业黄曲霉毒素污染控制提供了新的视角。本文研究了香菇多糖、海带多糖、石耳素等十余种多糖对黄曲霉生长及产毒的抑制作用。发现了香菇纤维素的一种衍生物(Glycoprotein, GPX)有着超强的抑制黄曲霉菌产毒活性。对香菇纤维素该种衍生物进行了结构鉴定,并对其作用机制进行了研究。研究结果如下1、10、50μg/mlGPX对黄曲霉菌产毒的抑制率分别达到70%、95%,而100、250、500、750、1000μg/ml的GPX对黄曲霉菌产生毒的抑制率均达到100%。经过100μg/mlGPX处理的花生对黄曲霉菌侵染,表现了良好的抗性。通过响应面法得到GPX最优提取工艺,提取温度130℃、液固比200、提取时间20min、提取次数一次。在验证实验中GPX的平均提取率为1.66%。2、单糖组成分析主要成分为葡葡糖,GPX经过Sepharose CL-6B凝胶柱层析得到单一对称峰,分子量约为2.4万Da。紫外光谱扫描可知GPX不含核酸。经红外光谱、‘H NMR及酶解电泳等显示GPX为β-葡聚糖,碱性-β消除反应可得知GPX中存在O-糖肽键。高碘酸氧化和Smith降解反应可得知GPX只含有1→4糖苷键。通过氨基酸组成测定发现,GPX中含氨基酸17.969%,氨基酸种类复杂,共包含14种氨基酸,其中谷氨酸、天门冬氨酸、亮氨酸、丙氨酸、苏氨酸、丝氨酸等含量较高,分别达到：3.114%、2.527%、1.603%、1.297%、1.284%、1.238%。3、GPX体外抗氧化活性几乎为零,但是可以缓解黄曲霉体内氧化应激水平。通过显微镜观察GPX处理后的黄曲霉菌丝细胞,发现形成了很多的大液泡,而囊泡与大液泡的融合已经被证实可以阻止黄曲霉素的合成。通过黄曲霉菌aflR和aflS基因转求的RT-PCR分析发现,GPX处理后黄曲霉细胞内aflR和aflS基因没有转录。通过结构分析,最终确定GPX为水溶性β-1,4-葡聚糖肽复合物。GPX的作用机制可能是通过黄曲霉菌膜上特异性受体介导,缓解了黄曲霉菌丝内氧化应激水平,抑制黄曲霉细胞内aflR和aflS基因的转录,促使细胞囊泡过早液泡化,从而抑制了黄曲霉毒素的合成代谢。