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背景和目的新生儿颅内出血(intracranial hemorrhage of the newborn)是新生儿期严重的脑损伤,多发生于早产儿,病死率高,且存活者常遗留各种严重的神经系统后遗症,包括智力障碍,感觉和运动功能障碍,共济失调,甚至是脑性瘫痪等。近年来随着我国围产医学保健的发展、产科技术的进步和新生儿重症监护治疗水平的提升,早产儿存活率明显提高,使得早产儿脑室周围-脑室内出血的发生率升高。早产儿脑损伤的类型包括脑室周围-脑室内出血(periventricular-intraventricular hemorrhage, PVH-IVH)和脑室周围白质软化(periventricular leucomalacia, PVL),早产儿脑室周围-脑室内出血的主要病因在于早产儿脑室管膜下生发基质毛细血管网不成熟,这些血管仅由单层内皮细胞构成,血管周围缺乏肌层和结缔组织支持,易因血压波动而破裂出血,脑室内出血后常常遗留脑积水、脑室周围静脉梗死等严重后遗症；早产儿脑室周围白质软化的主要病因在于脑缺血和少突胶质细胞前体的易感性,其病理改变为脑白质少突胶质细胞前体的急性坏死,在疾病的后期病灶区可形成多发性小囊肿,从而导致脑白质容量减少和髓鞘化障碍。新生儿颅内出血所造成的脑损伤目前尚无有效的治疗方法,但近两年的临床调查研究发现早产儿存在着不同程度的低甲状腺素血症,而同期的基础研究发现甲状腺素可以通过影响大鼠脑组织的促血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor, VEGF)和成纤维母细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, FGF)而促进大鼠脑血管的发育。本研究建立孕鼠模型,通过给予孕鼠甲状腺素,丙基硫氧嘧啶等不同干预因素观察孕鼠血液甲状腺素水平改变对新生仔鼠血清甲状腺素水平、脑组织VEGF水平及脑室管膜下生发基质VEGF的表达的影响,从而探讨甲状腺素干预孕鼠对新生仔鼠脑血管发育的影响。材料和方法1模型的建立：选取18只清洁级SD雌性大白鼠与清洁级SD雄性大白鼠交配,并于次日清晨取雌性大鼠阴道分泌物镜检,以显微镜下看到精子作为怀孕的第1天,将交配后的孕鼠随机分入3组：甲状腺素(thyroid hormone, TH)干预组,丙基硫氧嘧啶(PTU)干预组和对照组,自雌性大白鼠怀孕的第1天起,甲状腺素干预组每日在孕鼠饮水中加入左旋甲状腺素(0.02g/L),饮水每日更新；对照组每日给予正常饮水供给；丙基硫氧嘧啶干预组每日于孕鼠饮水中加入丙基硫氧嘧啶(1g/L),每日更新饮水。在孕鼠分娩第1天取新生仔鼠血及脑组织备用。2新生仔鼠血清总三碘甲腺原氨酸及血清总甲状腺素的测定：给予新生仔鼠麻醉后断头采血,血液经离心后取上层血清,采用电化学发光法测定血清中总三碘甲腺原氨酸及血清总甲状腺素的水平。3新生仔鼠脑组织VEGF水平的测定：将新生仔鼠断头取脑,脑组织经匀浆后离心取上层清液,采用酶联免疫吸附试验(大鼠VEGF酶联免疫试剂盒,美国RD生物科技公司)测定上清液中促血管内皮生长因子的水平。4新生仔鼠脑室管膜下生发基质VEGF的表达：完整取出新生仔鼠脑组织,将脑组织在4%多聚甲醛固定液中浸泡固定72h,常规石蜡包埋,取鼠脑冠状位做厚度为5um的连续切片。采用免疫组织化学SP法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶法)制作免疫组化切片。细胞浆呈棕黄色的细胞为VEGF阳性细胞。在40倍物镜下随机选取脑室周围区18个视野,并输入IPP6.0图像分析软件,求出各组织片每个VEGF阳性细胞的平均光密度值(OD值)。5统计学方法：所得各项实验数据均采用均数±标准差(x±s)表示,采用单因素方差分析和最小显著差(LSD)t检验,所有数据分析均采用SPSS16.0统计分析软件进行,P<0.05为差异有统计学意义。结果1甲状腺素干预组孕鼠所生新生仔鼠血清甲状腺素TT4、TT3值(TT4103.50±2.37ug/L,TT3 1269.63±32.18ng/L)显著高于对照组(TT4 45.11±0.43ug/L,TT3 884.57±20.85ng/L),对照组明显高于丙基硫氧嘧啶干预组(TT416.83±0.45ug/L,TT3 142.35±7.76ng/L),差异均有统计学意义。2甲状腺素干预组孕鼠所生新生仔鼠脑组织VEGF水平(53.46±10.62ug/L)明显高于对照组(11.15±1.33ug/L),对照组高于丙基硫氧嘧啶干预组(8.69±0.48ug/L),差异均有统计学意义。3脑室管膜下生发基质VEGF的表达：VEGF阳性细胞表现为胞浆有棕黄色颗粒沉积,甲状腺素干预组孕鼠所生新生仔鼠脑室管膜下生发基质VEGF阳性细胞的平均光密度值(OD 0.32±0.06A)显著高于对照组(OD 0.14±0.02A),对照组明显高于丙基硫氧嘧啶干预组(OD 0.03±0.01A),差异均有统计学意义。结论1孕鼠血液甲状腺素水平影响着新生仔鼠的血液甲状腺素水平,二者呈正相关。2新生仔鼠血液甲状腺素水平影响其脑组织促血管内皮细胞生长因子水平,二者呈正相关。3新生仔鼠血液甲状腺素水平影响其脑室管膜下生发基质促血管内皮细胞生长因子水平,二者呈正相关。