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复方痛风颗粒由知母、桂枝、生姜、防风等中草药组成。依据山东省某中医院知名老专家在临床上运用了多年的对痛风性关节炎有较好疗效的经验方,而研制的中药颗粒制剂。本课题采用多种动物模型对该药进行了药效学及作用机制初步研究。目的复方痛风颗粒通过家兔、大鼠两种急性痛风性关节炎模型观察对急性痛风性关节炎的作用,采用大鼠急性炎症模型、小鼠耳肿胀、小鼠热板、扭体法镇痛四种方法考察其抗炎镇痛效果,通过以上六种模型来初步探讨复方痛风颗粒的抗痛风作用机制,为临床用药提供实验依据。方法1.复方痛风颗粒对微晶型尿酸钠(Microcrystal sodium urate,MSU)致家兔急性痛风性关节炎(Acute gouty arthritis,AGA)的作用:复方痛风颗粒连续给药21d,第20天药后2h家兔关节腔注射80 mg/ml MSU混悬液0.4 ml/只制备AGA模型,第21d药后同法造模。于第1次致炎后1、3、5、24、29 h测关节肿胀度;末次致炎5h,测定关节液中WBC数目和PGE2含量,并测定关节滑膜组织中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、白细胞介素1 β(Interleukin 1 beta,IL-1 β)、白细胞介素8水平(Interleukin 8,IL-8),同时进行病理组织学检查。2.复方痛风颗粒对MSU致大鼠AGA的作用:复方痛风颗粒连续给药2天,首次药后即刻大鼠踝关节注射2.5 mg/ml MSU混悬液0.2 ml/只制备AGA模型。测定造模前和造模后1、3、5及24 h大鼠右后足容积;麻醉取血,测定血清中尿酸及前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)水平。3.复方痛风颗粒对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的作用:复方痛风颗粒连续21d。末次药后2h,大鼠足跖皮下注射1%角叉菜胶0.1 ml/只致足跖肿胀,测定造模前和造模后1、2、3、4及5h大鼠右后足容积。4.复方痛风颗粒对二甲苯致小鼠耳肿胀的作用:复方痛风颗粒连续给药14天。末次给药后2h,用微量注射器吸取25μl 100%二甲苯涂于右耳廓内面,左耳作为空白对照。15min后脱臼处死小鼠,剪下双耳,用8mm打孔器在同一部位打下圆耳片,称重,计算肿胀度、肿胀抑制率,从而评价药物对急性炎症反应的影响。5.复方痛风颗粒对小鼠热板法镇痛的作用:复方痛风颗粒连续给药14d。各组于末次给药后2h,放在事先加热到(55±0.5℃)的热板上,以舔后足为痛反应的指标,记录痛阈值。每鼠测定痛阈值2次(间隔1Omin),取其平均值。6.复方痛风颗粒对醋酸致小鼠扭体的镇痛作用:复方痛风颗粒连续给药15d。各组于给药2h后每鼠腹腔注射0.65%醋酸溶液(0.1 ml/10 g),注射后记录15 min内各组小鼠发生扭体反应次数。结果1.复方痛风颗粒对MSU致家兔AGA的作用:复方痛风颗粒高、中剂量3.0、1.5 g/kg/d与模型对照组比较,造模1、3、5h时家兔关节肿胀度明显减轻(P<0.01,P<0.05),关节液白细胞数目显著降低(P<0.01,P<0.05),炎症因子IL-1 β明显降低(P<0.05),PGE2、5-HT、IL-8未见明显影响(P>0.05)。复方痛风颗粒高、中、低剂量(3.0、1.5、0.75 g/kg)滑膜病理分值低于模型对照组,病变有所减轻,但统计学上未见显著性差异(P>0.05)。中剂量1.5 g/kg抗炎作用略优于痛风定0.18 g/kg,略逊于秋水仙碱4.0×10-5g/kg,均未见统计学差异(P>0.05)。2.复方痛风颗粒对MSU致大鼠AGA的作用:复方痛风颗粒高、中、低剂量6.8、3.4、1.7 g/kg/d与模型对照组比较,高剂量组动物在造模后3、5、24h关节肿胀度明显减轻(P<0.01,P<0.05),造模3h时抑制率达最大值为59.6%;中剂量组动物在造模24h时关节肿胀度明显减轻(P<0.05),抑制率达最大为35.9%;低剂量组关节肿胀度可见减轻但未显示统计学差异(P>0.05)。高、中剂量可明显降低血清中尿酸水平和炎症因子PGE2(P<0.01,P<0.05),秋水仙碱阳性对照组可明显降低炎症因子PGE2(P<0.05),秋水仙碱和痛风定阳性对照组对血清尿酸均未见明显影响(P>0.05)。中剂量3.4 g/kg降低血清中尿酸水平和PGE2略优于痛风定0.4 g/kg和秋水仙碱8.0×10-5 g/kg,均未见统计学差异(P>0.05)。3.复方痛风颗粒对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的作用:复方痛风颗粒高剂量6.8 g/kg/d与模型对照组比较,在造模后1、5h显示可显著抑制足跖肿胀度(P<0.01,P<0.05),造模2、3、4h时足跖肿胀度可见减轻但未见统计学差异(P>0.05),造模1h时抑制率最高,为77.3%。中剂量3.4 g/kg抗炎效果与痛风定0.4 g/kg相当,4h时抗炎效果弱于布洛芬0.07 g/kg(P<0.05),其余时间抗炎效果略逊于布洛芬0.07 g/kg但未见统计学差异(P>0.05)。4.复方痛风颗粒对二甲苯致小鼠耳肿胀的作用:高、中剂量13.4、6.7 g/kg/d与模型对照组比较,可显著降低耳廓肿胀度(P<0.01,P<0.05),抑制率分别为60.0%和45.9%。中剂量6.7 g/kg作用效果与痛风定0.8 g/kg、布洛芬0.13 g/kg相当。5.复方痛风颗粒对小鼠热板法镇痛的作用:高、中剂量13.4、6.7 g/kg/d与模型对照组比较,具有明显镇痛作用,热板小鼠的痛阈值明显升高(P<0.01,P<0.05)。中剂量6.7g/kg作用效果与痛风定0.8 g/kg、布洛芬0.13 g/kg相当。6.复方痛风颗粒对醋酸致小鼠扭体的镇痛作用:高、中剂量13.4、6.7 g/kg/d与模型对照组比较,具有明显镇痛作用,醋酸致小鼠扭体次数明显减少(P<0.01,P<0.05)。中剂量6.7 g/kg作用效果与布洛芬0.13 g/kg相当,略逊于痛风定0.8 g/kg,未见明显统计学差异(P>0.05)。结论:1、复方痛风颗粒(相当于人用剂量80、40g/d)对MSU诱导的家兔、大鼠AGA模型、二甲苯致小鼠耳部急性炎症均具有.显著的抗炎作用,对热板、醋酸致小鼠疼痛模型具有明显镇痛作用。复方痛风颗粒相当于人用量80g/d对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀急性炎症模型具有显著抗炎作用。研究表明复方痛风颗粒是有效的治疗急性痛风性关节炎的药物。2、作用机制:复方痛风颗粒(相当于人用剂量80、40g/d)通过降低血清中尿酸水平、减少炎性细胞因子PEG2、IL-1 β的生成,发挥其良好的抗炎、镇痛作用。3、与同类药物的比较:MSU致家兔、大鼠AGA实验表明本品(家兔:1.5 g/kg,大鼠:3.4 g/kg)作用略逊于秋水仙碱(家兔:4.O×1 0-5 g/kg,大鼠:8.0×10-5g/kg)略优于痛风定(家兔:0.18 g/kg,大鼠:0.4 g/kg)。角叉菜胶致大鼠足跖急性炎症实验表明本品3.4 g/kg抗炎作用弱于布洛芬0.07 g/kg,与痛风定0.4 g/kg相当。二甲苯致小鼠耳肿胀实验显示本品抗炎效果与布洛芬和痛风定相当,小鼠镇痛实验显示本品作用与布洛芬相当,略逊于痛风定(小鼠抗炎镇痛实验中,本品:6.7 g/kg,布洛芬:0.13 g/kg,痛风定:0.8 g/kg)。