胆固醇是哺乳动物体内最重要的一类甾醇小分子，它是细胞膜结构成分之一，参与调节细胞膜的流动性和相变。除此之外，胆固醇还参与一些脂筏介导的信号转导、内吞等生物学过程。同时，胆固醇也是体内一些重要小分子如胆汁酸、维生素和甾醇类激素等合成的重要前体小分子物质。胆固醇代谢异常会导致许多疾病的发生，如体内胆固醇水平过高可引起动脉粥样硬化并进而引发中风以及冠心病等;另外，胆固醇代谢失调也与老年痴呆症、肥胖、糖尿病等疾病存在密切关系。　　正常生理条件下，生物通过两条主要的负反馈途径-SREBP(sterol regulatoryelement-binding protein，甾醇调控元件结合蛋白)剪切和HMGCR(HMG-CoAreductase，甲羟基戊二酰辅酶A还原酶)降解途径-严格地控制着体内胆固醇水平。为了进一步探索胆固醇合成调控的分子机制，我们通过插入诱变、表达文库或shRNA文库筛选的方法来鉴定这两条主要调控通路中的蛋白质因子。　　最终，通过一种没有偏向性的插入诱变系统VBIM(Validation-Basedinsertional mutagenesis可以验证的插入诱变系统)，我们成功地鉴定出5个突变体。其中4个25-HC耐受的突变体要么包含一个N端截短型的SREBP-2，要么包含一个过表达的SCAP（SREBP cleavage activating protein，SREBP剪切激活蛋白）。另外一个SR-12813耐受的突变体则含有一个截短型的COOH-端具有催化活性的HMGCR。这项工作证明，对于胆固醇代谢研究来说，VBIM系统确实是一套非常高效的诱变工具。　　为了进一步集中探索甾醇调控的HMGCR降解机制，我们通过cDNA文库表达克隆的方法鉴定出一个潜在的调控蛋白质因子-COOH-端截短型的GRINA(GRINA-C)。GRINA-C可以极大的稳定HMGCR。同时，我们还通过共同转染的方法对人基因组编码的大约95个去泛素化酶（DUB）进行了逐一筛选。最终鉴定出USP20是一个可以调控甾醇依赖的HMGCR泛素化和降解的去泛素化酶。　　除此之外，通过一个小shRNA文库筛选，我们还发现了一个新的泛素连接酶RTM-I可以协同之前鉴定的泛素连接酶gp78共同参与HMGCR稳定性的调控。