【摘 要】
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目的构建S100A4基因高表达载体,建立稳定高表达S100A4基因的CNE2细胞系,研究S100A4转入对CNE2细胞的影响；测定与分析EMT标志物E-cadherin和Fibronectin、基质金属蛋白酶MMP2和
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目的构建S100A4基因高表达载体,建立稳定高表达S100A4基因的CNE2细胞系,研究S100A4转入对CNE2细胞的影响；测定与分析EMT标志物E-cadherin和Fibronectin、基质金属蛋白酶MMP2和MMP9表达水平,探讨S100A4基因表达与CNE2细胞侵袭能力及EMT的关系。方法本研究通过培养CNE2细胞,获取cDNA, PCR扩增S100A4片段,构建高表达S100A4基因的pCMV-S100A4重组质粒；采用脂质体法转染CNE2细胞,G418筛选,克隆挑选,建立S100A4稳定高表达的CNE2细胞系,以pCMV-CNE2细胞系、以未转染的CNE2细胞系为对照；Western blotting检测S1OOA4蛋白的表达能力；MTT法绘制细胞生长曲线；Western blotting,检测E-cadherin、Fibronectin、MMP2及1MMP9的表达；Transwell实验,检测细胞侵袭能力变化。结果1、成功构建pCMV-S100A4重组质粒；2、pCMV-S100A4-CNE2细胞稳定高表达S100A4; 3、pCMV-S100A4-CNE2细胞系生长增殖速度加快；4、pCMV-S100A4-CNE2侵袭细胞计数增多；5、pCMV-S100A4-CNE2细胞E-cadherin蛋白表达降低、Fibronectin、MMP2及MMP9表达增强。结论1、S100A4导入CNE2细胞,其生长增殖速度加快,侵袭能力增强；2、S100A4参与CNE2细胞的EMT过程。
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