磷酸三钙/壳聚糖支架用于牙周组织再生工程的实验研究

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背景牙周炎是一个影响牙龈、牙周膜、牙骨质和牙槽骨的炎症疾病,它能严重影响将近10%成年人群,导致骨吸收并最终导致牙齿的丧失。牙周治疗的最终目的是为了修复炎症疾病所致的受损牙周支撑组织,其中牙周膜再生也是主要目的之一。在牙周治疗研究中目前主要集中于如何改善组织再生的诱导或釉质基质的诱导等临床再生过程。已有研究者已经开始关注通过应用组织工程方法来再生牙周膜。对组织工程来说,以细胞为基础的组织工程技术是一个最可靠的替代方法。这种方法主要依靠反应细胞、支持基质和生物反应分子三者之间的相互作用。三维的微环境对于组织工程来说是非常必要的。壳聚糖是甲壳素N端脱乙酰化的产物,它具有可修复、生物降解、生物相容性、无抗原性、无毒素以及具有生物功能等特点。壳聚糖作为组织工程材料的价值已经被研究,虽然壳聚糖无抗原性,但是大量研究者仍然发现宿主组织对以壳聚糖作为工程材料的移植存在免疫反应。一般来说,这些材料都能引发非常小的宿主对异物的免疫排斥反应。磷酸三钙具有良好的生物相容性、生物活性及生物降解性。动物或人体细胞可以在磷酸三钙材料上正常生长,分化和繁殖。现有资料表明磷酸三钙已经被广泛应用于骨科、口腔颌面外科、牙周修复等方面。含有磷酸三钙和壳聚糖的混合材料将可能更好的应用于细胞生物工程领域。在本实验中将通过冰冻干燥的方法准备磷酸三钙/壳聚糖混合物,并从体内和体外研究其对人牙周膜干细胞生长增殖以及在裸鼠体内的生物相容性及牙周膜干细胞分化的影响。方法通过冷冻干燥法制备不同浓度的磷酸三钙/壳聚糖支架,体外培养牙周膜干细胞,扫描电镜检测支架孔隙及牙周膜干细胞贴壁生长状况。作MTT检测(四甲基偶氮唑盐)和ALP(碱性磷酸酶)活性检测细胞分化。体内实验:将接种牙周膜干细胞的支架植入裸鼠皮下,4周后观察牙周再生情况。结果随着磷酸三钙(TCP)的含量增加,磷酸三钙/壳聚糖支架孔隙率降低,细胞生长贴壁及增殖未见明显区别。磷酸三钙/壳聚糖支架相比单纯壳聚糖支架能显著增强细胞分化。体内实验能形成类牙骨质组织。结论磷酸三钙/壳聚糖支架能很好地应用于牙周组织再生工程。
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