近年来,细菌靶向治疗已成为肿瘤生物治疗的一大研究热点,天然的或者是基因修饰的非致病菌成为了潜在的抗肿瘤制剂。兼性厌氧菌E.coli Nissle1917是一类安全性较高的益生菌,对肿瘤细胞有较好的靶向性,不仅可以在肿瘤低氧区和坏死区定植,也可以在肿瘤富氧区聚集,受肿瘤大小及肿瘤内微环境等因素的限制较小,因而可以作为肿瘤治疗的的理想载体。基于以上这些特性,本研究以E.coli Nissle1917为载体传递抗肿瘤药物天青蛋白。但是E.coli Nissle1917是胞外菌,对肿瘤细胞没有侵袭性,降低了药物传递和治疗效率。本研究利用Red/ET同源重组技术构建转座载体pR6K-inv-hly、然后利用转座技术将质粒上来自将假结核耶尔森菌的的侵袭素基因inv和单核细胞增多性李斯特菌的溶血素基因hly随机整合至EcN菌株的染色体上,使益生菌EcN具有了兼性胞内菌的特性,裂解宿主细胞的吞噬泡膜,在胞浆中增值并可侵袭肿瘤细胞的能力。其次,利用RT-PCR、SDS-PAGE以及液相色谱-质谱(LC/MS)等技术,从基因和蛋白表达水平对侵袭素和溶血素进行了鉴定,同时用激光共聚焦显微镜观察工程菌对肿瘤细胞的作用,结果显示工程菌EcNVY对B16、HCT-116等肿瘤细胞有较好的侵袭活性。最后,将构建的抗肿瘤蛋白Azurin表达载体pET28a-vhb-azurin转化工程菌EcNVY,经SDS-PAGE和Western Blotting技术对Azurin蛋白进行了鉴定,同时细胞活性检测实验发现该工程菌对B16细胞的抗肿瘤效果显著增强,这可能与工程菌EcNVY直接传递抗肿瘤蛋白Azurin到肿瘤细胞内部有关,但具体机制还有待进一步研究。本研究表明基于E.coli ssle1917的改造工程菌EcNVY是高效传递抗肿瘤药物的优良载体,这为以E.coli Nissle1917作为基因治疗的载体奠定了重要基础。