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大血藤属于大血藤科植物大血藤Sargentodoxa cuneata(Oliv.) Rehd.et Wils.的干燥藤茎。据天然化学组分的化学极性，溶解性等不同并通过不同的提取方法从大血藤提取化学组分，主要分为苯丙素类、挥发性组分、木脂素类、三萜类等天然药物化学成分。临床用大血藤及其复方对妇科病，慢性阑尾炎、盆腔炎、胃病有很好治疗作用同时也用于滋补强壮。本实验室对大血藤各提取部位及其化学组分药理活性研究，对小鼠炎症模型有显著的治疗效果且有显著抑菌作用。 炎症致使线粒体性能受到破坏、氧化应激反应导致异常蛋白积累进而引发神经退行性疾病。本文研究大血藤总多糖(tPSC)，脱蛋白后多糖(cPSC)，透析后粗多糖(PSC)及分离后均一组分PSCA-1、PSCB-1体外抗炎活性及对低分化小鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞不同损伤模型保护作用并且初步研究多糖对PC12保护的作用机制，并比较糖苷类化合物sargentol(HT-1)对巨噬细胞炎症模型的抗炎作用及对PC12细胞不同损伤模型神经保护作用。 1.超声辅助提取大血藤多糖超声辅助提取大血藤多糖，以液料比、提取温度、提取时间及超声功率等进行单因素实验，考察对多糖提取率影响的因素水平。以此为基础，选择液料比、提取温度、提取时间三因素水平，根据Box-Behnken实验设计原理，计算机模拟得出17个响应面试验分析点，得到最佳优化提取大血藤水溶性多糖条件为料液比为1:30，提取温度为65℃，提取时间为2h，提取2次，重复3独立试验，结果得到大血藤多糖平均提取率为13.21%，与理想数据之间，相对误差为-0.313%，与预期值靠近，表明模型可靠。 2.大血藤多糖纯化分离及其理化性质研究经最佳优化条件提取大血藤多糖，85%乙醇醇沉后得大血藤粗提物。HP-20大孔吸附树脂对tPSC进行初步纯化包括脱色，除杂；采用蒽酮-硫酸法多糖含量检测，以多糖吸附率及解析率为指标，筛选最佳型号大孔吸附树脂。最终选择大孔吸附树脂型号为HP-20进行大血藤醇沉粗提物进行脱色。生物酶法脱蛋白后得PSC，全波长扫描结果显示在260cm-1和280cm-1下无特征吸收峰。DEAE纤维素柱分离PSC得PSCA、PSCB两种主要多糖组分。将PSCA、PSCB经Sephadex G-100分离得均一组分PSCA-1， PSCB-1。经FT-IR分析，PSCA-1及PSCB-1在主要官能团吸收峰上有微小差别，两者都含有α糖苷键。 3.抗炎作用及部分机制研究 MTT法检测tPSC、cPSC及PSC三种多糖对巨噬细胞(RAW264.7)增殖的影响，一氧化氮(NO)浓度为指标研究LPS作用RAW264.7时间；三种样品及HT-1对RAW264.7炎症模型治疗作用或预防作用研究；荧光酶标仪检测PSCA-1及PSCB-1对LPS刺激巨噬细胞生成炎症模型后对RAW264.7细胞的一氧化氮合成酶(iNOS)活性的影响。结果表明在一定实验浓度范围内三种多糖具有促进细胞增殖作用，据此选择合适的样品实验浓度。随着时间增加，LPS刺激RAW264.7细胞产生NO浓度增加，选择LPS刺激12h为后续实验的刺激时间。大血藤多糖对巨噬细胞炎症模型的预防作用效果显著。PSC、PSCA-1、PSCB-1预防炎症作用实验，PSC及PSCA-1作用效果显著。当PSCA-1样品浓度为3μg/mL时，iNOS酶活性显著降低，PSCB-1在0.3~3μg/mL iNOS酶活性显著降低，并呈浓度依赖性。 4.抗氧化、神经保护及其作用机制研究在体外实验中，在一定范围内 PSC具有很好的还原力，清除 DPPH和总抗氧化力。采用 MTT法比较大血藤糖苷HT-1对PC12细胞增殖的影响，比较PSC、PSCA-1、PSCB-1对鱼藤酮或叠氮钠损伤PC12细胞存活率的影响，比较HT-1对双氧水，鱼藤酮及叠氮钠损伤PC12细胞模型细胞增殖的影响。采用FITC-Annexin V检测；乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒，活性氧检测试剂盒及SOD酶检测试剂盒研究PSC对鱼藤酮损伤PC12细胞的保护作用机制。结果表明HT-1在一定浓度范围内对PC12细胞增殖有一定促进作用，据此可选择适当实验浓度。HT-1在鱼藤酮损伤 PC12模型中，10μmol/L能够显著抑制细胞凋亡。PSC、PSCA-1、PSCB-1作用于鱼藤酮损伤模型效显著。PSC在实验浓度1~100μg/mL范围内，显著抑制LDH释放减少细胞死亡，控制活性氧水平，减小SOD酶活力。但流式细胞术检测PSC对细胞凋亡无影响。