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异沙叶蝉(Psammotettix alienus L.)是一种重要的传毒介体昆虫,以持久性非增殖方式传播小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus,WDV),该病毒引起的小麦矮缩病是世界上重要病毒病害之一。为了研究异沙叶蝉传播WDV的分子机制,本论文利用分离泛素酵母双杂交膜系统,以WDV的外壳蛋白(Capsid protein,CP)基因为诱饵对异沙叶蝉cDNA文库进行了筛选。以实验室饲养的异沙叶蝉为材料,提取其总RNA后,利用SMART法构建得到以pPR3-N为载体的异沙叶蝉分离泛素酵母双杂交膜系统cDNA文库;同时构建了带有Sfi I酶切位点的诱饵载体pDHB1-WDV CP。经功能检测后用诱饵载体初步筛选pPR3-N空文库,得到了适合筛库的条件和确定了His基因产物抑制剂3-氨基-1,2,4-三唑(3-AT)的使用浓度。然后用诱饵载体筛选异沙叶蝉cDNA文库,对筛选结果进行了分析,再通过共转验证和β-半乳糖苷酶检测进一步验证是否发生互作。利用Uniprot和KEGG在线网站,对筛选到的蛋白进行Gene Ontology(GO)注释和Pathway分析。检测结果表明:初级文库库容量超过2.0×106cfu;文库实际扩增数量大于1.3×106 cfu;文库重组率大于97%;扩增文库插入片段平均长度大于1000 bp,表明异沙叶蝉cDNA文库的质量较高。酶切验证显示诱饵载体pDHB1-WDV CP中CP基因的插入完整而准确。功能检测表明融合蛋白能够正确表达。在3-AT浓度为5 mmol?L-1的筛选条件下,诱饵载体筛选异沙叶蝉cDNA文库得到280个克隆,经测序和Blast比对分析最终得到12个可能与WDV的CP发生互作的异沙叶蝉蛋白质。将这12个蛋白质再次进行共转验证和β-半乳糖苷酶检测,最终得到9个蛋白质与WDV CP互作。GO注释显示,9个蛋白参与的生物过程包括蛋白去磷酸化,碳水化合物代谢过程,先天性免疫应答,模式识别受体的信号通路,运输,同向运输,乙醇氧化等;分子功能包括金属离子结合活性,蛋白磷酸酶活性,信号模式识别受体的活性,水解酶活性,磷酸离子载体活性,叶酸运输活性等。参考KEGG数据库,这些蛋白参与的代谢途径有:泛素介导的蛋白水解途径,内吞作用,花生四烯酸代谢途径,cAMP信号通路,模式识别受体的信号通路等。异沙叶蝉分离泛素酵母双杂交膜系统cDNA文库的成功构建与筛选,为研究异沙叶蝉传播小麦矮缩病毒的机制奠定了基础。