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灵芝是一种珍稀食药用真菌,在我国具有悠久的药用历史。灵芝药理活性成分复杂,应用范围广泛,兼具药理功效和美白、抗衰老等保健功能。近年来化妆品市场上主打灵芝概念的护肤品种类日益增多,但均以灵芝子实体水/醇提取物为主要功能性成分。灵芝子实体原料存在生产成本高、周期长、环境因素影响多等弊端。而以生物发酵为基础生产的灵芝发酵液可以有效解决以上问题,但目前尚缺乏对相关产业技术的研究。因此,本研究以中华红芝为材料,在中华红芝子实体发酵技术、中华红芝菌丝体发酵及其工艺优化、菌丝体发酵液稳定性、功能性成分分析等方面进行了研究,为灵芝天然化妆品原料开发和工业化生产提供了理论基础和技术支持。现将主要研究结果总结如下:1.将中华红芝子实体分别进行酿酒酵母单独发酵、保加利亚乳杆菌单独发酵、酿酒酵母与保加利亚乳杆菌复合发酵,并测定不同处理条件下灵芝子实体发酵液美白和抗氧化指标。结果表明:经酿酒酵母和保加利亚乳杆菌复合发酵中华红芝子实体发酵液美白、抗氧化功效最好,复合发酵后其灵芝浆液DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)清除率为40.50%、超氧阴离子清除率为20.96%(P<0.01),酪氨酸酶抑制率为42.40%(P<0.01),显著高于中华红芝子实体水/醇提取液。2.对中华红芝菌丝体发酵体系进行培养基配方和发酵条件优化,确定最优培养基配方为麦芽浸粉2%,蔗糖1.72%,豆粕粉0.0214%,酵母提取物0.1%;最优培养条件为:pH 5,温度30℃,培养时间6 d。以酪氨酸酶抑制率为指标,检测灵芝菌丝体发酵液稳定性,结果表明:中华红芝菌丝体发酵液对紫外线、高温、pH、反复冻融条件的敏感性较低,可见其美白活性具有良好的稳定性。此外,将中华红芝菌丝体发酵液与其子实体发酵液相比较,结果证实菌丝体发酵液美白、抗氧化能力相对较好,酪氨酸酶抑制率、DPPH清除率、超氧阴离子清除率分别可达94.20%、70.50%、42.70%,分别是子实体复合发酵处理条件下的2.22倍、1.74倍和2.04倍(P<0.01)。可见,菌丝体发酵液具有更好的护肤品应用潜力。3.利用LC-MS/MS代谢组学分析了灵芝菌丝体发酵液中美白相关的多种成分,结果表明:灵芝三萜和多糖在灵芝菌丝体发酵液中显著富集,表明其对中华红芝的美白活性具有重要意义。经测定灵芝子实体发酵液中总糖、三萜含量分别为8.6 mg/g、5.7 mg/g,而菌丝体发酵液中总糖与三萜含量分别可达253.6 mg/g与123.0 mg/g,与其酪氨酸酶抑制率成正相关。由此可知多糖和三萜是中华红芝发酵液的美白功能性成分。