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目的：肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是肝脏的原发性恶性肿瘤，发病率占全球第五，但严重的预后不良使得其致死率升至第三。HCC的主要发病诱因有乙肝病毒（HBV）感染，肝硬化，丙肝病毒（HCV）感染，饮酒过度及黄曲霉毒素摄入等。MicroRNAs(miRNAs)是一类在进化上高度保守，长约22nt，由内源基因编码的小非编码RNA，能够在转录后水平调控基因的表达。现有大量的实验研究表明：细胞内的miRNAs在HCC的病程中亦可发挥重要作用，而同样有越来越多的证据发现，许多人和动物的病毒亦可编码miRNAs，并且在宿主细胞中发挥作用。在前期研究中，本实验室通过深度测序以及大量的印证性实验证明了HBV编码的miRNA(HBV-miR-2)的存在，并且发现HBV-miR-2亦可影响肝癌细胞的转移和增殖能力。本课题主要探究HBV-miR-2对下游基因TRIM35和RAN的表达调控及其机制。 方法：为了弄清楚HBV-miR-2在肝癌细胞中发挥作用的机制，我们首先利用生物信息学软件预测HBV-miR-2的候选靶基因，并分析已知的相关功能，最终选定TRIM35和RAN作为HBV-miR-2的靶基因进行研究。为了确定HBV-miR-2能靶定TRIM35和RAN的3’UTR，并以此来实现其功能，我们构建了EGFP荧光报告载体，该载体包含TRIM35和RAN的3’UTR野生及突变区，荧光报告载体实验证明：TRIM35和RAN能被HBV-miR-2直接靶定。进一步通过实时定量PCR(RT-qPCR)及western blot证明:HBV-miR-2能够靶定,并且抑制TRIM35的表达、促进RAN的表达。同时，在肝癌细胞中进行了一系列功能性实验，发现TRIM35抑制细胞的恶性行为，而RAN促进其恶性行为；最后亦进行了挽救实验，发现在肝癌细胞中过表达TRIM35或敲降RAN，HBV-miR-2对细胞的作用得到挽救，确定TRIM35和RAN是HBV-miR-2发挥功能的下游基因。 结果：1.过表达HBV-miR-2能从蛋白水平和mRNA水平抑制TRIM35的表达但促进RAN的表达，封闭HBV-miR-2引起相反的结果；荧光报告载体实验也证明了，HBV-miR-2直接靶定TRIM35和RAN，从而负向调控TRIM35的表达，正向调控RAN的表达。2.功能性实验显示：在肝癌细胞中，TRIM35抑制其增殖、侵袭及迁移能力，RAN亦可促进其恶性行为。3.通过挽救实验发现：过表达TRIM35或者敲降RAN后，减弱了HBV-miR-2对肝癌细胞的作用，证明其是HBV-miR-2发挥功能的下游基因。 结论：本研究发现HBV-miR-2能够直接靶定并负向调控TRIM35的表达，正向调控RAN的表达；在肝癌细胞中，TRIM35能够抑制其生长转移，RAN能够促进其生长转移,从而从下游分子途径解释了HBV-miR-2调控肝癌细胞的作用机制。