目的:胃癌是中国常见的恶性肿瘤之一,在癌症引起的死亡原因中位列第三,在中国,大部分患者就诊时已经处于进展期,所以很多治疗手段并未能获得令人满意的疗效,而目前关于胃癌的发生机制尚不明确。CDK5RAP3蛋白是CDK5激活蛋白P35、P39的结合蛋白。CDK5RAP3被报道涉及癌症的发生发展,但它在胃癌中的表达和功能尚未被研究。本研究首先观察CDK5RAP3在胃癌组织中的表达情况,结合临床病理和生存资料,分析CDK5RAP3在临床胃癌患者中可能扮演的角色。其次本课题通过体内外的分子生物学实验研究CDK5RAP3与胃癌细胞增殖、侵袭及迁移的关系。最后,探讨CDK5RAP3介导胃癌发生发展的下游基因及潜在的相关机制。本研究旨在明确CDK5RAP3在胃癌发生发展中所扮演的角色以及潜在的下游机制,有望能为胃癌的早期及潜在靶点治疗提供新的理论基础。方法:1.采用IHC、qPCR及Western Blotting检测CDK5RAP3在人体胃癌样本中的表达情况,并观察CDK5RAP3与临床胃癌患者病理资料及生存预后的相关性。2.利用包装好的慢病毒构建稳定过表达CDK5RAP3及稳定沉默CDK5RAP3的胃癌细胞株HGC-27、NUGC-3和MGC-803。3.通过CCK8、细胞计数法及平板克隆形成实验在构建好的稳转胃癌细胞株中探讨CDK5RAP3表达对胃癌细胞增殖的影响。4.利用划痕实验和Transwell小室检测CDK5RAP3表达是否介导胃癌细胞侵袭迁移的改变。5.通过构建裸鼠皮下成瘤模型验证CDK5RAP3对HGC-27稳转胃癌细胞株在裸鼠皮下肿瘤形成的影响;6.利用双荧光素酶报告基因、核质分离、共聚焦、免疫荧光等技术初步探讨CDK5RAP3潜在的下游靶基因以及可能存在的分子机制。结果:1.CDK5RAP3的mRNA表达及蛋白表达在胃癌组织相较于癌旁的正常组织显著下调（P<0.05）。2.CDK5RAP3是胃癌患者临床预后的独立影响因素,CDK5RAP3低表达的胃癌患者术后五年生存率（42.1%）显著低于CDK5RAP3高表达的胃癌患者（63.0%）（P<0.05）。3.CDK5RAP3的表达影响了胃癌细胞的增殖能力、侵袭及迁移能力。稳定过表达CDK5RAP3的胃癌细胞株会出现增殖、侵袭及迁移能力减弱的现象,而稳定沉默CDK5RAP3后的胃癌细胞株则会出现相反的结果。4.过表达CDK5RAP3可以降低β-catenin蛋白的表达,并且CDK5RAP3影响胃癌细胞功能学的改变正是依赖于β-catenin蛋白的表达情况。5.CDK5RAP3通过对抑制GSK-3β的磷酸化Ser9位点水平而影响β-catenin蛋白的表达。6.CDK5RAP3对临床胃癌患者的预后生存影响是依赖于β-catenin蛋白表达定位情况。结论:1.CDK5RAP3与胃癌发生发展密切相关,CDK5RAP3是胃癌患者预后的独立因素,有望作为胃癌预后预测的新指标;2.CDK5RAP3不仅介导影响了胃癌细胞的增殖能力,而且改变了胃癌细胞的侵袭、迁移等生物学行为。3.CDK5RAP3能通过抑制GSK-3β磷酸化水平而负调节β-catenin蛋白表达,在临床上可以作为治疗胃癌的潜在靶点。