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研究目的:1.总结并分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,m TOR）抑制剂（本研究为雷帕霉素,又称西罗莫司）在结节性硬化症（Tuberous sclerosis complex,TSC）相关癫痫患儿中的疗效及安全性,有助于规范其在TSC中使用的适应证、剂量与疗程的确定,提高治疗TSC的疗效。通过不同个体对m TOR抑制剂的反应性,为临床治疗提供有价值的信息。2.检测TSC患儿的基因突变方式,总结结节性硬化症基因突变特点,探讨基因突变类型与表型的相关性,提高结节性硬化症的诊断水平,为我国TSC分子遗传学研究提供相关资料,为治疗TSC及指导优生优育提供遗传学证据。研究方法:1.收集临沂市人民医院自2017年1月至2019年6月儿科收治的TSC合并癫痫的患儿,根据入选和排除标准共纳入78例。给入组患儿口服雷帕霉素口服液治疗。在雷帕霉素使用过程中因发生全身性水肿停药1例,因发生四肢水肿停药1例,最终76例患儿纳入研究。为观察服药后雷帕霉素控制癫痫发作的疗效,我们不建议任何患儿在服用雷帕霉素后调整抗癫痫药物（Antiepileptic drugs,AEDs）,但因为研究前雷帕霉素对TSC相关癫痫疗效尚不明确,部分患儿家长自行选择调整AEDs,因此根据研究过程中是否调整AEDs将患儿分为2组,其中AEDs改变组39例,AEDs非改变组37例。比较所有患儿在服用雷帕霉素后24周、48周控制癫痫发作的疗效,然后根据对AEDs改变组和AEDs非改变组进行分别分析,确定其疗效是否与更换抗癫痫药物有关。观察患儿脑电图的改善情况,记录不良反应的发生。2.收集最终纳入研究的76例TSC患儿及父母双亲的血样,通过目标序列捕获结合高通量测序技术对患儿的TSC1及TSC2基因进行检测。根据美国医学遗传学及基因组学学会（American College of Medical Genetics and Genomics,ACMG）指南分析突变的致病性,并分析患儿基因型与临床表型之间的相关性,基因突变类型与雷帕霉素疗效的相关性。研究结果:1.对76例患儿雷帕霉素治疗后24周、48周进行总体疗效评估,24周总有效率（完全控制率+显效率+有效率）为69.7%（53/76）,48周总有效率为76.3%（58/76）。雷帕霉素治疗后24周、48周癫痫控制率较治疗前均有显著改善（P＜0.001）。24周疗效评估时AEDs改变组总有效率为71.8%（28/39）,AEDs未改变组总有效率为67.6%（25/37）,48周疗效评估时AEDs改变组总有效率为79.5%（31/39）,AEDs未改变组总有效率为73.0%（27/37）,24周及48周总有效率AEDs改变组均高于AEDs未改变组,但两组间均无统计学差异（P＞0.05）。多因素Logistic回归分析显示服用雷帕霉素的初始年龄是影响其对癫痫控制疗效的重要因素。76例患儿随访至48周时有52例（68.4%）脑电图有不同程度的好转。76例患儿在使用雷帕霉素治疗48周内,有11例有反复口腔溃疡,7例频繁呼吸道感染,均为轻度不良反应。2.对76例患儿均行TSC基因检测,69例（92.9%）检出TSC基因突变,其中47例（68.1%）为新发突变,22例（31.9%）为家族性遗传。TSC1基因突变25例（36.2%）,其中错义突变4例,移码突变8例,无义突变9例,剪切突变4例;TSC2基因突变44例（63.8%）,其中错义突变13例,移码突变8例,无义突变11例,剪切突变5例,大片段缺失5例,大片段重复2例。共检测到16个未见报道的TSC1/TSC2突变位点,包括TSC1:c.1934-1938del,p.P645Rfs*41（移码突变）;c.822del C,p.Y275Ifs*43（移码突变）;c.648dup T,p.E217＿E218delins X（移码突变）;TSC2:c.1716G＞T,p.Q572H（错义突变）;c.5234G＞C,p.R1745P（错义突变）;c.2365G＞A,p.V789I（错义突变）;c.4569del G,p.E1523Dfs*53（移码突变）;c.1799＿1800ins CAGCT,p.Y602Sfs*98（移码突变）;c.1471dup T,p.S491Ffs*10（移码突变）;c.4024C＞T,p.Q1342X（无义突变）;c.2096A＞C,p.Q699P（错义突变）,c.1485dup C,p.I496Hfs*5（移码突变）;c.4990-1G＞A（剪切突变）;c.695＿697dup AAT,p.Leu233X（无义突变）;c.788T＞C,p.L263P（错义突变）;c.25del T,p.S9Qfs*3（移码突变）。在6例患儿中发现了3个相同位点的突变c.2074C＞T,p.R692X（病例1和31）,c.3598C＞T,p.R1200W（病例2和46）,c.682C＞T,p.R228X（病例34和45）。根据ACMG分级有55例致病性变异,6例可能致病变异,1例为意义不确定的变异（Uncertain significance,VUS）。TSC2基因突变的发生率明显高于TSC1（1.76:1）,在神经精神障碍及婴儿痉挛症发生率方面,TSC2组和TSC1组相比具有统计学意义（P＜0.05）。研究结论:1.雷帕霉素治疗TSC相关癫痫有确切的疗效,且安全性较好。长期持续治疗对维持疾病可能是必要的,年龄越小、越早治疗可能获益更大2.结节性硬化症患儿TSC基因突变多为新发突变,大部分以TSC2突变为主,TSC2突变在神经系统方面临床表型较TSC1更严重,需要更多的监测和干预;发现未被报道的TSC1/TSC2基因突变,增加了结节性硬化症致病基因的突变位点数目,扩展了结节性硬化症的基因谱,完善并丰富了数据库;通过对检测出结节性硬化症患儿进行遗传学诊断,为产前诊断提供遗传学证据,再次证实了基因诊断的重要性。