【摘 要】
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大豆中的异黄酮97%以上以配糖体苷形式存在。大豆异黄酮糖苷酶可水解大豆异黄酮的糖基使其生成苷元,从而提高大豆异黄酮的生物活性。本文主要研究产大豆异黄酮糖苷酶的发酵条
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大豆中的异黄酮97%以上以配糖体苷形式存在。大豆异黄酮糖苷酶可水解大豆异黄酮的糖基使其生成苷元,从而提高大豆异黄酮的生物活性。本文主要研究产大豆异黄酮糖苷酶的发酵条件,大豆异黄酮糖苷酶的性质,酶解条件以及大豆异黄酮糖苷酶转化前后的雌激素活性。
从四种微生物菌中筛选得到了大豆异黄酮糖苷酶高效产酶菌株Absidia sp.R,采用正交实验法确定了该菌发酵产酶培养基为:麦芽汁6°,诱导物为槐花,浓度为1.0%,蛋白胨0.2%,(NH4)2SO40.1%,KH2PO40.2%,吐温-80,0.5g/L。用饱和度为65%的硫铵沉淀粗酶液,酶液经DEAE-Cellulose DE52阴离子交换柱进行分离纯化,提纯后的大豆异黄酮糖苷酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为51kDa。该酶的性质如下:酶温度稳定的范围为30℃~50℃,酶的pH值稳定范围为4.0~7.0。酶解条件为:酶最佳反应时间为80min,酶反应最佳温度为40℃,最佳pH值为5.0最佳底物浓度为1.5%。
采用转基因酵母模型检测了大豆异黄酮酶转化前后的雌激素活性。结果显示,酶转化后的大豆异黄酮雌激素活性有较大幅度的提高,主要是由于染料木苷和大豆苷转化成染料木素和大豆苷元所致。
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