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目的:通过制作新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,检测脑损伤后大鼠松果体中micro RNA的表达谱变化;并进行松果体细胞培养,建立细胞缺氧缺糖模型,用miR-375慢病毒载体转染细胞,检测转染效率及松果体功能的变化,探讨miR-375在缺氧缺糖中对松果体功能的影响。方法:采用7日龄SD新生大鼠,根据改良Rice-Vannucci法建立HIBD模型。将新生大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺氧缺血组(HIBD组),采用基因芯片及RT-qPCR法检测HIBD后24 h大鼠松果体中micro RNA表达谱的变化;采用新生24h以内的SD大鼠进行松果体培养,行氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)的处理方法,模拟缺氧缺血模型。选取氧糖剥夺后0 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h六个时间点,RT-qPCR测定氧糖剥夺前后AANAT mRNA及miR-375表达的变化;ELISA法检测褪黑素(MT)水平的变化;用CCK8法检测细胞活性。采用miR-375慢病毒载体转染后,行上述实验,初步探讨松果体中micro RNA在缺氧缺血性脑损伤中的可能机制。结果:1、芯片及RT-qPCR结果显示,新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后松果体中micro RNA表达谱发生变化。2、RT-qPCR结果显示,缺氧缺糖后miR-375表达上调,24 h达到高峰后下降,72 h趋向0 h水平;AANAT表达下调,12 h左右达最低点,72 h趋向0 h水平;miR-375慢病毒转染细胞后miR-375表达明显上调,72 h趋于稳定;AANAT表达下调,48 h趋于稳定;miR-375慢病毒转染细胞后行缺氧缺糖实验,miR-375表达上调,24 h达到高峰;AANAT表达下调,24 h左右达最低点。3、ELISA结果发现,缺氧缺糖后MT分泌水平下降,24 h左右达最低点,96 h左右恢复缺氧缺糖0 h水平;miR-375慢病毒转染细胞后MT分泌水平下降,72 h趋于稳定;miR-375慢病毒转染细胞后行缺氧缺糖实验,MT分泌水平下降,24 h及48h之间达最低点。4、CCK8结果显示,缺氧缺糖0.5 h、1 h后,细胞增长活力无明显变化,缺氧缺糖2 h后,可使松果体细胞获得适度损伤,缺氧缺糖3 h后,细胞活力明显下降。结论:1.新生大鼠HIBD后松果体micro RNA表达谱发生改变,其中miR-375明显上调。2.松果体细胞缺氧缺糖后miR-375、AANAT表达,分泌MT水平均发生变化。3.松果体细胞缺氧缺糖损伤后,miR-375加重缺氧缺糖造成松果体功能的损害。4.松果体细胞会随缺氧缺糖时间延长细胞活性下降。