香菇（Lentinus edodes）是我国第一大食用菌,兼具营养与保健价值,在改善人民生活和脱贫攻坚方面发挥了重要作用,并将在乡村振兴中发挥更积极的作用。但是由于我国以往在香菇等食用菌科研方面投入低,尚需开展更多的遗传育种研究。因此,本项目在国家食用菌产业技术体系香菇岗位专项的资助下,对12个香菇亲本（出发）菌株进行生理（细胞不亲和）、生化（酯酶同工酶）、表型（农艺性状）评价的基础上,筛选出遗传距离较远且优势互补的两个菌株香菇XG4619和XT08。对两个菌株进行原生质体单核化,分析是否存在单极化现象;开展有丝分裂产物（原生质体）、减数分裂产物（孢子）的交配及亲代、子代（F1、F2）生理、生化、表型的遗传差异分析,为进一步开展香菇育种提供遗传理论、方法、种质资源的支持。具体结果如下:（1）亲本评价和亲本筛选12个香菇亲本菌株在体细胞不亲和性、酯酶同工酶、农艺性状方面具有丰富的遗传多样性。筛选出两个遗传距离较远且优势互补的菌株XG4619和XT08,用于原生质体制备及单核化的供试菌株。（2）优化出原生质体制备和单核化条件研究酶解温度、酶解时间、稳渗剂浓度对供试菌株原生质体制备和单核化的影响,优化出原生质体制备条件为:酶解温度30℃,酶解时间约3.5h,稳渗剂甘露醇浓度0.6mo L/L。（3）原生质体杂交的遗传特性通过原生质体技术获得菌株XG4619单核体3个（b19、b20和b28）且交配型相同（设定为A1B1）,XT08原生质体单核体5个（T21、T24、T28、T29和T30）交配型也相同（设定为A2B2）,说明两个菌株原生质体单核化过程中发生了交配型偏分离现象,均只能获得一个交配型的原生质体单核,未获得另一个交配型的原生质体。利用XG4619和XT08单核菌株交配制备的F1杂交菌株（b19×T21、b19×T24、b20×T30、b28×T30）,在生理、生化、表型上均表现出遗传差异。这揭示出香菇次生菌丝体每个细胞中的单倍体双核作为有丝分裂产物,看似独立存在,实质却发生了部分遗传物质交换或重组。（4）自交菌株遗传多样性随机取一个F1杂交菌株（b19×T21）子实体进行单孢分离,获得减数分裂产物（孢子）195个。单孢子发芽形成单核菌株后,选取2个交配型相同（设交配型为A1B1）的单核菌株,分别与另50个交配型（A2B2）不同的单核菌株进行自交,自交菌株F2在菌丝生长速度、菌丝浓密度、菌落边缘形态等方面存在显著的遗传多样性,说明减数分裂产物（孢子）发生了强烈重组。（5）获得4株原生质体杂交菌株、195株单孢分离的单核菌株、100株自交菌株。