【摘 要】
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目的:体外实验探讨鞣花酸（ellagic acid,EA）对BRCA1基因沉默和过表达的三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:1.采用不同浓度的EA（0μg/m L、1μg/m L、5μg/m L、10μg/m L和20μg/m L）分别作用MDA-MB-231细胞24 h、48 h和72 h后,用MTT法检测不同时间点的细胞增殖能力,并分别计算其IC50以筛
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目的:体外实验探讨鞣花酸（ellagic acid,EA）对BRCA1基因沉默和过表达的三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:1.采用不同浓度的EA（0μg/m L、1μg/m L、5μg/m L、10μg/m L和20μg/m L）分别作用MDA-MB-231细胞24 h、48 h和72 h后,用MTT法检测不同时间点的细胞增殖能力,并分别计算其IC50以筛选最佳药物浓度。2.利用脂质体法分别将BRCA1 siRNA和BRCA1 OE转染三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞后,通过实时免疫荧光定量（Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot,Wb）法检测BRCA1的表达,确定BRCA1 siRNA和BRCA1 OE是否成功转染入MDA-MB-231细胞。3.以终浓度为5μg/m L的EA作用0 h、24 h、48 h、72 h、96 h,采用MTT法检测不同时间点的细胞增殖能力。4.划痕实验检测24 h和48 h时的细胞迁移能力。5.Transwell小室检测24 h的细胞迁移和侵袭能力。6.RT-q PCR和Western blot检测PARP1 mRNA和蛋白的表达情况。结果:1.不同浓度的EA（1～20μg/m L）处理MDA-MB-231细胞24 h、48 h和72 h后均能抑制细胞增殖,IC50分别为13.739μg/m L、10.645μg/m L、5.344μg/m L。2.BRCA1 siRNA可有效地转入三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞并沉默BRCA1基因;BRCA1 OE可有效地转入三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞并过表达BRCA1基因。3.在敲低实验中MTT检测结果显示EA作用48 h、72 h和96 h后siRNA+EA组的OD值均明显小于对照组、EA组和阴性对照组（P<0.001）;过表达实验中EA组OD值均低于对照组、BRCA1 OE+EA组和阴性对照组（P<0.001）。4.在敲低实验中划痕实验结果显示siRNA+EA组细胞迁移率均较其他3组低（P<0.001）;过表达实验中EA组细胞迁移率较其他3组低（P<0.01）。5.在敲低实验中Transwell小室迁移和侵袭实验结果均显示siRNA+EA组穿膜细胞数均较其他3组低（P<0.001）;过表达实验结果显示EA组的穿膜细胞数均较其他3组低（P<0.01）。6.在敲低实验中RT-q PCR和Western blot检测结果显示siRNA+EA组的PARP1 mRNA和蛋白表达量均显著低于其他3组（P<0.001）;过表达实验中EA组的PARP1 mRNA和蛋白表达量均低于其他3组（P<0.001）。结论:1.鞣花酸在体外抑制人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,呈剂量依赖关系。2.鞣花酸在体外对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞、BRCA1基因沉默和过表达MDA-MB-231细胞的创伤愈合能力、侵袭和迁移有明显的抑制作用。3.鞣花酸能够抑制人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞、BRCA1基因沉默和过表达MDA-MB-231细胞PARP1蛋白表达。4.鞣花酸对BRCA1基因沉默和过表达的人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的抑制作用机制可能与抑制DNA修复通路关键因子PARP1表达有关。
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