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目的：本课题研究旨在建立人细小病毒B19 (Human Parvovirs B19, HPV B19)与新型细小病毒4(Parvovirus 4, Parv4)的TaqMan探针实时定量PCR检测体系,并对这两套检测体系分别进行敏感性、特异性、重复性等方法学评价。在此基础上,初步对我国原料血浆及血液制品中的HPV B19与Parv4分别进行核酸检测筛查工作,进而作出其污染的风险初步评估。方法：采用全基因合成的方法构建标准品质粒,10倍梯度系列稀释后分别进行HPV B19 DNA和Parv4 DNA TaqMan实时定量PCR扩增实验。根据每个稀释梯度的Ct值和相对应的标准品质粒拷贝数的1g值,Microcal Origin 6.0软件分析作图,可分别得到其标准曲线方程式；分别对HPV B19 DNA检测方法与Parv4 DNA检测方法进行敏感性评价、特异性评价以及重复性评价；对单人份原料血浆、混合原料血浆、不同类型的血液制品提取核酸后分别进行HPV B19 DNA与Parv4DNA实时定量PCR检测筛查。对筛查结果进行数据统计分析。结果：得到HPV B19扩增的标准曲线方程式为：y=42.055-3.439x,相关系数r =0.9995; Parv4扩增的标准曲线方程式为：y=42.791-3.443x,相关系数|r|=0.9997。两种检测体系的敏感性均可达到10 copies/μL,并且有很好的特异性与重复性。进行HPV B19核酸检测筛查结果显示：在单人份血浆中,HPV B19 DNA阳性率为58.82%(40/68),最高浓度可达到9.16x104 copies/μL,病毒载量介于101～103copies/μL的阳性样品数比率为90%(36/40)；在混合原料血浆中,HPV B19 DNA阳性率为59.49%(116/195),最高浓度可达1.35x107copies/μL,病毒介于101～104copies/μL的阳性样品数比率为70.69%(82/116)；在血液制品中,HPV B19 DNA阳性率为92.98%(53/57),最高浓度为2.15×l06copies/μL,病毒载量介于102～105copies/μL的阳性样品数比率为47.18%(25/53)；进行Parv4核酸检测筛查的结果显示：在单人份血浆中,Parv4 DNA阳性率为24.24%(16/68),最高浓度可达到5.18×102copies/μL,病毒载量介于101～102copies/μL的阳性样品数比率为56.25%(9/16);在混合原料血浆中,阳性率为26.15%(51/195), Parv4 DNA最高浓度可达2.35x104copies/μL,病毒载量介于101～103copies/μL的阳性样品数比率为60.78%(31/51)；在血液制品中,Parv4 DNA阳性率为64.91%(37/57),最高浓度为8.47×104copies/μL,病毒载量介于103～105copies/μL的阳性样品数比率为67.57%(25/37)结论：对原料血浆及血液制品中HPV B19与Parv4这两种人细小病毒检测筛查发现,病毒阳性率均较高,且血液制品中细小病毒的污染较为严重。在血液制品中两种细小病毒的病毒载量主要集中范围为102～105copies/μL,高于混合原料血浆中病毒载量主要集中范围(10～104copies/μL)；相应地,混合原料血浆中病毒浓度要略高于单人份血浆(10～102/3copies/μL)。然而,在所有检测的两种人细小病毒的阳性样品中,较大比例的阳性样品中其病毒载量并不高。这说明HPV B19与Parv4在人体内可通过血液及血液制品传播,可能长期以低浓度状态潜伏于人体;也可能是由于细小病毒会在血液制品中不断富集的缘故；同时也说明1份含高拷贝的细小病毒血浆可能会致使整批次混合血浆污染。但是,如果针对混合原料血浆的minipools进行核酸扩增检测(NAT)筛查,可大幅度降低混合原料血浆及血液制品中人细小病毒的污染率,从而保障血液制品的病毒安全性。