【摘 要】
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病毒的调控蛋白在病毒的基因表达与调控过程中具有重要的作用.Borf-1是牛泡沫病毒编码的唯一调控蛋白,能够反式激活位于长末端重复序列和env基因内部的启动子.JDV TAT是Jembr
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病毒的调控蛋白在病毒的基因表达与调控过程中具有重要的作用.Borf-1是牛泡沫病毒编码的唯一调控蛋白,能够反式激活位于长末端重复序列和env基因内部的启动子.JDV TAT是Jembrana Disease Virus编码的反式调控因子可以通过结合RNA的TAR序列提高转录效率.ICP0和BICP0分别是人疱疹病毒和牛疱疹病毒编码的调节蛋白可以促进病毒基因的表达.该文以这上述四种蛋白为材料,经PCR构建表达质粒,并利用大肠杆菌进行表达.通过对诱导条件的优化获得可溶性表达蛋白,结果Borf-1和ICPON端片断在37℃即能够可溶性表达,而JDV TAT和BICPO需要进行低温诱导在18℃进行可溶性表达.在此基础上根据不同蛋白的特性利用亲合层析,离子交换层析和分子排阻层析等方法对蛋白进行纯化,通过优化条件,四种蛋白均获得较高纯度.对于纯化效果理想的Borf-1进行结晶相关研究,运用动态光散射和圆二色谱的方法对分子的均一性和二级结构进行测定.发现在溶液中Borf-1是以多聚体的形式存在的,其二级结构中α螺旋的含量较低.利用气相扩散法进行Borf-1的晶体生长,摸索晶体生长的条件.实验发现Borf-1在以聚乙二醇(PEG)作为沉淀剂时,生成了类似晶体的沉淀,并在此基础上进行晶体生长条件的优化.
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