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为了探讨Ghrelin对雌激素诱导小鼠胸腺萎缩的影响及其分子机制,本试验观察了此过程中小鼠胸腺的形态学变化,并用实时定量PCR法检测了胸腺中部分细胞因子及凋亡相关蛋白基因mRNA表达量的变化。试验分为两部分进行:
1、雌激素诱导小鼠胸腺萎缩及其相关基因mRNA表达量的变化。SPF级5周龄Balb/c雌性小鼠40只,随机分为2组,每组20只,适应饲养1周后进行动物试验:(1)雌激素组:按0.05 mL/只(含苯甲酸雌二醇0.1mg)隔日腹腔注射苯甲酸雌二醇注射液2周;(2)生理盐水对照组:按0.05 mL/只隔日腹腔注射0.9％生理盐水2周。动物试验结束后,统计小鼠胸腺指数,观察胸腺的显微结构,并检测胸腺中细胞因子IL-6、IL-7和TGF-β1及凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、FADD、FasL基因mRNA表达量的变化。
结果表明,注射苯甲酸雌二醇后,小鼠胸腺指数显著降低(P＜0.05),胸腺在宏观形态上明显萎缩,从胸腺显微结构上可见胸腺细胞数量大大减少并且多数呈现为凋亡细胞的典型形态特征;胸腺中细胞因子TGF-β1 mRNA表达量显著上升(P＜0.05),IL-6 mRNA表达量略有上升(P＞0.05),而IL-7 mRNA表达量显著降低(P＜0.05);胸腺中凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase9、FADD mRNA表达量均显著升高(P＜0.05),FasL mRNA表达量略升高(P＞0.05),而Bcl-2 mRNA表达量显著降低(P＜0.05)。说明本试验用雌激素诱导小鼠胸腺萎缩是成功的,雌激素可能一方面通过调节胸腺细胞因子抑制胸腺上皮细胞的增殖,另一方面通过激活Caspase级联程序的启动和执行阶段以及Fas/FasL凋亡信号通路促进胸腺细胞的凋亡,从而诱导小鼠胸腺萎缩。
2、Ghrelin对雌激素诱导小鼠胸腺萎缩及其相关基因tuRNA表达量的影响。SPF级5周龄Balb/c雌性小鼠80只,随机分为4组,每组20只,适应饲养1周后进行动物试验:(1)雌激素+Ghrelin实验组:按0.05 mL/只(含苯甲酸雌二醇0.1mg)隔日腹腔注射苯甲酸雌二醇注射液2周,最后一次注射48h后按0.1 mL/只(含Ghrelin120μg)隔日腹腔注射Ghrelin2周;(2)雌激素+生理盐水对照组:按0.05 mL/只(含苯甲酸雌二醇0.1mg)隔日腹腔注射苯甲酸雌二醇注射液2周,最后一次注射48h后按0.1 mL/只隔日腹腔注射0.9%生理盐水2周;(3)生理盐水对照组:按0.05～mL/只隔日腹腔注射0.9%生理盐水2周,最后一次注射48h后按0.1 mL/只隔日腹腔注射0.9%生理盐水2周;(4)空白对照组:不做任何处理,同等条件饲养4周。动物试验结束后,其它处理同上。
结果表明,注射Ghrelin后,小鼠胸腺指数显著增加(P＜0.05),雌激素诱导的小鼠萎缩胸腺在宏观形态上基本恢复到正常水平,胸腺细胞数量也有所增加,细胞形态恢复正常;胸腺微环境中细胞因子IL-6和TGF-β1 mRNA表达量显著降低(P＜0.05),而IL-7 mRNA表达量略为升高(P＞0.05);胸腺中凋亡相关蛋白Caspase3、FADD mRNA表达量显著降低(P＜0.05),Caspase9、FasL mRNA表达量略有下降(P＞0.05),而Bcl-2 mRNA表达量略有上升(P＞0.05)。由此我们推测,Ghrelin可能通过促进胸腺上皮细胞的增殖以及阻断Caspase级联程序和Fas/FasL凋亡信号通路抑制胸腺细胞的凋亡,从而逆转雌激素诱导的小鼠胸腺萎缩。