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青龙衣为胡桃科植物胡桃楸(Juglands mandshurica Maxim.)的未成熟外果皮,具有较强的消炎、镇痛及抗肿瘤等药理作用,特别是抗肿瘤作用,已经得到了临床应用。萘醌以及二芳基庚烷是青龙衣发挥抗肿瘤作用的主要活性成分,具有极高的研究价值,但目前国内外针对青龙衣的研究主要集中在胡桃醌的药理活性方面,对其他萘醌以及二芳基庚烷的提取分离工艺研究较少。本研究首次建立了同时检测青龙衣中萘醌以及二芳基庚烷类成分的高效液相色谱方法,并通过高速均质-超声一体化技术对其活性成分进行了高效提取,利用高速逆流色谱技术实现主要有效成分的分离纯化。本文通过对青龙衣中主要活性成分的分析检测以及提取纯化工艺的探究,为深度开发和利用青龙衣资源提供了重要的科学依据。研究成果如下:1.建立了高效液相色谱同时检测青龙衣中的2种萘醌(胡桃酮和胡桃醌)以及4种二芳基庚烷类成分(茸毛香杨梅苷元、茸毛香杨梅酮、2-Oxatrycyclo[13.2.2.13,7]eicosa-3,5,7(20),15,17,18-hexaen-10-16-diol、胡桃宁 A)的分析方法:色谱柱:Diamonsil C18V(5 μm,250 mm × 4.6 mm i.d.),进样量 5μL,柱温 30℃,流速1.0mL/min;流动相:乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B);梯度洗脱条件:0-28 min,23-41%A;28-30 min,41%A;30-35 min,41-45%A;35-53 min,45%A;检测波长:254 nm(0-28 min)和280 nm(28-53 min)。方法学验证表明,六种目标化合物在检测范围内呈现良好的线性关系(R2>0.999),检出限(LOD)和定量限(LOQ)分别小于0.83 μg/mL和1.61μg/mL,并且该HPLC分析方法的重现性、精密度及稳定性良好,加样回收率较高(R.S.D.<5%)。利用优化后的色谱方法,检测本批次青龙衣药材中胡桃酮、胡桃醌、茸毛香杨梅苷元、茸毛香杨梅酮、2-Oxatrycyclo[13.2.2.13,7]eicosa-3,5,7(20),15,17,18-hexaen-10-16-diol 和胡桃宁 A 的含量分别为 1.721 mg/g、0.457 mg/g、1.772 mg/g、0.565 mg/g、2.156 mg/g、0.872 mg/g。2.优化了高速均质-超声一体化提取技术对青龙衣中的目标萘醌及二芳基庚烷类主要成分的最佳工艺参数:高速均质速率:8000 rpm超声功率:250 W乙醇浓度:83%液固比:21 mL/g提取时间:13 min在上述最佳工艺条件下进行了实验,结果显示,经过一次提取实验,胡桃酮、胡桃醌、茸毛香杨梅苷元、茸毛香杨梅酮、2-Oxatrycyc lo[13.2.2.13,7]eicosa-3,5,7(20),15,17,18-hexaen-10-16-diol 和胡桃宁 A 的平均提取率分别为 1.304 mg/g、0.308 mg/g、1.401 mg/g、0.413 mg/g、1.692 mg/g、0.671 mg/g。3.建立了高速逆流色谱两步分离纯化青龙衣中两种萘醌以及四种二芳基庚烷类化合物的工艺:第一步分离:溶剂体系:正己烷:乙酸乙酯:乙醇:水=8:7:7:4主机转速:850 rpm洗脱流速:2.0 mL/min固定相保留率:83%上样量:200 mg检测波长:254 nm,280 nm第二步分离:溶剂体系:正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=5:4:6:5主机转速:850 rpm洗脱流速:1.5 mL/min固定相保留率:90%检测波长:280nm在上述优化条件下,经过两次分离,共得到6种化合物,即胡桃酮、胡桃醌、茸毛香杨梅苷元、茸毛香杨梅酮、2-Oxatrycyclo[13.2.2.13,7]eicosa-3,5,7(20),15,17,18-hexaen-10-16-diol、胡桃宁 A,确定此步骤中 6 种化合物的回收率均大于 80%,纯度均在 95%以上。通过高速均质-超声一体化提取和高速逆流色谱分离纯化后,青龙衣中六种萘醌及二芳基庚烷类主要成分胡桃酮、胡桃醌、茸毛香杨梅苷元、茸毛香杨梅酮、2-Oxatrycyclo[13.2.2.13,7]eicosa-3,5,7(20),15,17,18-hexaen-10-16-diol、胡桃宁 A 的最终得率分别为 0.636 mg/g、0.331 mg/g、1.081 mg/g、0.371 mg/g、1.298 mg/g、0.558 mg/g,最终收率分别为 36.98%、72.35%、60.99%、65.72%、60.19%、63.98%。本论文首次对青龙衣中萘醌及二芳基庚烷类主要成分的提取与纯化工艺进行研究,为青龙衣资源的合理开发与深入利用提供了理论依据,也为其他植物次生代谢产物的高效提取与分离纯化提供了技术支持。