冰胶固定化脂肪酶的制备及催化合成脂肪酸甲酯的研究

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本文研究了一种新型固定化脂肪酶的制备,并运用其催化合成了脂肪酸甲酯。具体包括以下三个部分:1.固定化脂肪酶的制备与表征研究了由丙烯酰胺、N,N-亚甲基双丙烯酰胺、丙烯酸、烯丙胺混合,加入脂肪酶,并以过硫酸铵、亚硫酸氢钠作为引发剂,分别在常温与-20℃下共聚制得常规凝胶固定化脂肪酶与冰胶固定化脂肪酶,将冰胶固定化脂肪酶与游离酶及规凝胶固定化脂肪酶进行比较,通过对比发现,冰胶固定化脂肪酶具有较高的催化活性及良好的稳定性。并探讨了聚合物酸碱性与聚合物单体配比的选择,实验结果表明:中性、丙烯酰胺与N,N-亚甲基双丙烯酰胺的质量比为10:1为聚合物最佳合成条件。对所制备的固定化脂肪酶进行了扫描电镜的拍摄,并通过实验得到最佳反应温度为40℃,最佳醇油摩尔比为1:1,固定化脂肪酶与油的质量百分比20%为最佳。2.胶束电动毛细管色谱分析三甘油酯的酯交换过程利用所制得的固定化脂肪酶催化酯类化合物的酯交换反应,并通过胶束电动毛细管色谱对酯类化合物及其酯交换反应的产物进行了分析,通过实验探讨得出了胶束电动毛细管色谱分析的最佳条件,选择最佳吸收波长为234nm,采用高差进样法,进样的时间为20s,选择的分离电压为-5kV,电流为50mA左右,选择的缓冲体系为:由pH为8.0的5mmol/L的Tris、200mmol/L的咪唑、50mmol/L的SDS组成的缓冲液。并在此条件下,利用胶束电动毛细管色谱分别测定了三油酸甘油酯、经固定化脂肪酶催化反应了一段时间后的三油酸甘油酯,得出了不同的酯交换反应色谱图,体现了制得的固定化脂肪酶对酯类化合物的良好的催化性能。3.固定化酶催化合成脂肪酸甲酯结合了毛细管微乳色谱对所制得的固定化脂肪酶进行了进一步的应用,利用所制得的固定化脂肪酶催化了不同来源的地沟油,得到了不同的色谱图,实验结果表明,所制备的固定化脂肪酶对不同的地沟油都有一定的催化作用,可以推广应用于催化不同来源的地沟油。并且研究了利用固定化脂肪酶催化地沟油合成脂肪酸甲酯,探讨了催化反应时间、催化反应温度等不同实验条件对地沟油催化转化的影响,选择的最佳催化时间为24h,最佳催化反应温度为40℃。实验表明,所制得的固定化脂肪酶不仅对各种油具有良好的催化性能,而且还具有较高的稳定性,因此可以推测所制得的固定化脂肪酶将有较广阔的应用前景。
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