人脐血单个核细胞移植对卵巢早衰大鼠卵巢功能的影响

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目的:本研究旨在探讨人脐血单个核细胞(HCMNCs)在大鼠卵巢早衰模型中的修复作用,以期为临床细胞治疗卵巢早衰提供一种理论和实验依据。  方法:1、本实验取7-8周龄wistar大鼠60只,随机分成A、B、C组。2、A组饲喂普通食物丸,不予特殊处置;B组及C组饲喂35%半乳糖食物丸以达到大鼠卵巢功能发生功能衰竭,建立卵巢早衰模型。3、行阴道脱落细胞涂片观察各组大鼠各组动情周期变化,于饲喂50天时每组随机选取10只大鼠断颈取血,利用血清ELISA方法检测血清E2、FSH、LH水平,并取卵巢组织行HE染色,观察卵巢卵泡数目变化,确定POF造模成功;4、利用Ficoll密度梯度离心法制备HCMNCs细胞悬液。5、确定模型建立成功后, A组大鼠不予任何处置, B组剩余大鼠双侧卵巢各注入10ul HCMNCs细胞悬液,C组将等量的L-DMEM培养基注入剩余大鼠的双侧卵巢。6、细胞移植后50天,每只大鼠断颈取血,利用血清ELISA方法检测血清E2、FSH、LH水平,并收集卵巢组织常规石蜡包埋及冰冻后备用。将准备好的石蜡包埋组织切片,进行HE染色,观察卵巢未闭锁卵泡数量及卵巢形态学情况。  结果:1、35%半乳糖食物丸饲喂大鼠50d后,B组、C组大鼠较A组大鼠动情周期紊乱率升高,血清E2水平降低,LH、FSH水平升高,差异有统计学意义。2、HCMNCs细胞悬液移植后50天,B组大鼠动情周期紊乱率较C组有明显的减少,阴道脱落细胞涂片开始有上皮细胞、角化细胞、白细胞等多样细胞交替的变化。3、35%半乳糖喂养后50天,B组、C组E2降低,FSH、LH水平升高,差异有统计学意义(p<0.001)。4、HCMNCs细胞悬液移植后50天,B组血清E2水平较C组升高,两者具有明显统计学差异(p<0.001);LH、FSH水平较C组LH、FSH水平降低,两者具有明显统计学差异(p<0.001)。5、35%半乳糖喂养后,B、C组卵巢组织病理切片中未闭锁卵泡数目明显减少,差异有统计学意义(p<0.001)。HCMNCs移植后50天,卵巢病理切片形态学观察B组未闭锁卵泡数目较C组明显增多,两者具有统计学意义(p<0.001)。  结论:人脐血单个核细胞参与修复受损卵巢的功能,可缓解低雌激素的状态,对卵巢早衰的治疗起到积极的作用。
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