Wnt信号通路在造血干细胞的自我更新和增殖中起着重要作用。白血病是一类造血干细胞的恶性增殖性疾病。使用化疗药物是临床上治疗白血病最有效的手段之一,但白血病对化疗药物产生耐药性是白血病化疗预后复发的难题。经典的Wnt/β-catenin信号通路途径参与调节细胞凋亡、增殖、耐药相关基因的表达。Wnt/β-catenin信号通路中通过一系列酶促反应包括Dishevelled受体家族蛋白质的激活及最终β-catenin进入细胞核与TCF/LEF转录因子家族作用并促进特定基因的表达。β-catenin与TCF的关系,促使我们课题的开展。本课题采用TCF/LEF报告基因转染到几种急性髓系白血病细胞中构建转染细胞体系检测培养的细胞中Wnt信号转导途径的活性,通过流式分析在分选仪上分选出Wnt信号表达强弱的细胞群进行克隆形成实验观察这些表达不同强弱Wnt信号的细胞的增殖功能差异性。同时也通过化疗药物的处理来分析研究这些白血病细胞对化疗药物诱导后Wnt信号的表达情况来研究白血病中的耐药性与Wnt信号活性的关系。我们发现体外培养转染的几种髓系白血病细胞在流式分析仪上Wnt信号表达不同,同时我们利用流式分选仪分选出这些表达不同强弱Wnt信号的白血病细胞进行克隆形成实验,结果表明Wnt信号弱阳性和强阳性的细胞都具有克隆形成能力,化疗药物处理后的白血病细胞Wnt信号弱阳性和强阳性的耐药性没有太大区别。我们发现我们引入的报告系统对于白血病细胞不起作用。Sirtuin蛋白是一组具有NAD+依赖性的组蛋白去乙酰基转移酶,Sirts家族包括了Sirt1–Sirt7七个成员。该家族是一个从细菌到复杂真核生物高度保守的蛋白质家族,大量研究证实Sirtuin具有广泛的生理功能,并在调控衰老和寿命方面发挥重要的作用。有研究表明Sirtuin家族成员Sirt2是一种重要的肿瘤抑制因子,Sirt2异常可导致性别特异性肿瘤形成。MLL-R白血病中的发生发展已有了较深入的研究,但Sirt2对此类白血病中发生发展以及它们对化疗药物的反应研究还不多,本课题利用MLL-AF9,MLL-ENL Sirt2野生型和MLL-AF9,MLL-ENL Sirt2敲除型白血病细胞做研究,通过体内移植实验,体外细胞培养生长曲线的检测,克隆形成实验,以及细胞周期,化疗药物处理,来初步研究Sirt2基因对这些白血病发生发展以及耐药中的影响作用。我们发现体内移植实验中Sirt2缺陷型白血病细胞对小鼠的致病能力要比Sirt2野生型快。体外培养的这些白血病细胞Sirt2野生型的增殖能力低于Sirt2敲除型的白血病细胞,细胞周期上也有差异,对化疗药物的耐药性Sirt2野生型要强于Sirt2缺陷型,我们初步证明Sirt2有抑制白血病的发展的作用,同时它的缺失有助于白血病减弱对化疗药物的耐药性。因此对Sirt2在MLL-R白血病发生发展中的分子机制研究还需要进一步的探索。