目的:应用噬菌体肽库技术和分子生物学方法,分析和确定泡球蚴Em18抗原表位。方法:DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建截短的PET41a-Em18.4(81aa-160aa),经诱导、表达和纯化后,Western Blot及ELISA方×法对其进行鉴定。用纯化后的rEm18-GST免疫新西兰白兔,获得抗rEm18-GST的多克隆抗体,用加入GST抗原的镍-螯合物亲和层析树脂(His·Bind Resin)对此抗体进一步纯化,以获得去除GST抗体的抗Em18多克隆抗体,ELISA法确定效价。以之作为靶分子,应用噬菌体随机7肽库进行筛选。经过5轮的淘筛和富集,随机挑取46个阳性噬菌斑扩增,凝胶电泳分析后,提取DNA测序,结果经BLAST软件分析,并与Em18进行同源性比较。结果:成功构建了PET41a-Em18.4原核表达质粒,rEm18.4-GST重组蛋白得到成功表达,SDS-PAGE显示相对分子量为41KDa,Western blot和ELISA结果显示rEm18.4-GST重组蛋白未能被AE病人阳性血清识别。获得去除抗GST的抗Em18多克隆抗体,ELISA确定效价为1:5 1200,Western Blot显示该抗体不与GST发生交叉反应。使用噬菌体7肽库经过5轮筛选后,噬菌体富集率达到10~3倍,46个噬菌体克隆DNA序列结果经Blast软件分析后,发现为9个不同的序列,与Em18核苷酸同源性比较后未发现有同源性。结论:Em18的抗原表位可能不位于81—160aa部分,所筛选的Em18抗原噬菌体7肽是否是Em18抗原的模拟表位,有待进一步验证。