由于禽类独特的生殖系统,一个新生种鸡蛋已经是一个包含六万个左右细胞的鸡胚。鸡蛋的外壳坚硬,鸡蛋黄大而脆弱,不像哺乳动物的卵子是透明的从而便于显微注射操作。近年来随着慢病毒的广泛应用和鸡原始生殖细胞的成功培养,转基因鸡的制备主要使用慢病毒注射和鸡原始生殖细胞转移法这两种方法,获得的Go代转基因鸡外源基因的嵌合率高达52.2%。目前有细菌β-内酰胺酶,人类单克隆抗体和单链Fv-Fc融合蛋白等几种重组蛋白成功地在转基因鸡蛋清中表达,本研究成功地利用慢病毒制备了在蛋清中表达重组人溶菌酶的转基因鸡。溶菌酶(LY)又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶,广泛存在于牛奶,唾液,哺乳动物泪水以及禽类蛋白中。鸡溶菌酶(cLY)由129个氨基酸残基组成,分子质量为14.3kDa,人溶菌酶(hLV)由130个氨基酸残基组成,分子质量为14.7kDa,这两种蛋白的组成氨基酸有59%的同源性。尽管这两种溶菌酶的组成如此相近,人溶菌酶的抗菌活性却是鸡溶菌酶的三倍。人溶菌酶具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤的功效,并且对人体完全无毒害、无副作用,是一种安全的抗感染物质和天然防腐剂,也是婴儿食品、饮料的良好添加剂。然而,天然的人溶菌酶只能从乳汁、尿液、中性粒细胞和胎盘中少量提取,利用鸡输卵管生物反应器则有望低成本、大规模地生产人溶菌酶；同时,鸡蛋清的抗菌能力主要归功于溶菌酶的存在,因此,鸡蛋中增加人溶菌酶成分能增加鸡蛋的抗菌能力从而延长食品蛋的货架期和种蛋的储存期,有利于食品蛋的保存和运输以及规模化育种,具有重大的潜在经济效益。在本研究中,我们构造了一个基于复制缺陷型慢病毒的载体,该载体利用一个克隆的2.8kb在输卵管特异表达的鸡卵清蛋白启动子调控表达一段447bp人工合成的人溶菌酶cDNA序列,人溶菌酶cDNA序列前端还插入了一段人工合成的鸡溶菌酶信号肽。通过显微注射将包装好的慢病毒导入至X期的鸡胚胚盘下腔,我们成功的获得了生殖系嵌合的Go代转基因鸡。对G0代公鸡精液的PCR和定量PCR检测结果表明外源基因hLY在精液的嵌合度为0.001-0.1。我们挑选了6只精液hLY阳性的公鸡与野生型白来航母鸡配种,检测了830只G1代雏鸡中外源基因hLY的插入情况,其中5只(0.60%)被鉴定为阳性鸡。ELISA检测的结果表明G1代中唯一的一只转人溶菌酶母鸡蛋清中重组人溶菌酶的表达量为57.66±4.10μg/mL, G1代转人溶菌酶公鸡A011家系的G2代转人溶菌酶母鸡蛋清中重组人溶菌酶的表达量为48.72±1.54μg/mL。对G1代和G2代转人溶菌酶母鸡蛋清的ELISA和免疫荧光检测证实了在我们获得的转基因鸡中,外源基因hLY能种系传递并且持续地在鸡输卵管中表达。对G2代转人溶菌酶母鸡和野生型白来航母鸡各组织的RT-PCR和输卵管组织的免疫荧光实验说明了重组人溶菌酶只特异地在输卵管组织中表达,具有组织特异性表达。本研究采用显微注射慢病毒法成功地获得了在鸡输卵管稳定地表达人溶菌酶的转基因鸡。转基因母鸡输卵管是一种较转基因哺乳动物系统更具经济效益的生物反应器,这项研究的结果可以为转基因母鸡生产药用蛋白等应用提供参考。