精氨酸与纤维连接蛋白联合应用对创面愈合影响的研究

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cashwang
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:通过制作大鼠背部创伤模型,在大鼠模型的饮食中加入适量的L-精氨酸(L-arginine L-Arg),并在伤口局部联合应用纤维连接蛋白(Fibronectin FN),干预创面的愈合过程,观察L-精氨酸与纤维连接蛋白联合应用对创面愈合速度和愈合质量的影响;并通过免疫组织化方法揭示创伤过程中一氧化氮合酶的表达规律;通过光镜观察愈合期间不同阶段的成纤维细胞数量及胶原纤维含量;通过组织化学方法检测肉芽组织中羟脯氨酸含量;通过实验前后的对比,计算创面的愈合率。研究L-精氨酸与纤维连接蛋白联合应用对促进伤口愈合的影响,为临床探索一条促进创面愈合的有效方法,并为进一步深化创面愈合修复的临床研究提供客观的实验依据。 方法: 1、实验动物:雄性健康Wistar大鼠48只,称重,编号。 2、实验分组:将大鼠随机分为4组:即对照组(0.9%生理盐水)、实验A组(L-精氨酸500mg/kg/d联合0.5mg/ml的FNO.05ml.)、实验B组(0.5mg/ml的FNO.05ml)、实验C组(L-精氨酸500mg/kg/d)。每组12只。 3、创面模型制备方法:大鼠背部剪毛,10%硫化钠脱毛,温水清洗,拭干。次日,用10%水合氯醛腹腔注射麻醉(30 mg/kg)成功后,将大鼠固定在手术台上。在背部脊柱两侧旁开1cm,头尾两端平行于脊柱各标记一个直径1.8 cm,面积2.54 cm<2>的圆形切口线。经碘伏消毒皮肤后,用剪刀沿标记线剪除全层皮肤至深筋膜,形成4个圆形创面。取0.5mg/ml纤维连接蛋白溶液注射于实验A组及B组创面筋膜层及创缘皮下组织内,每个创面0.05 ml,对照组和实验组均给予0.9%生理盐水敷料包扎。待大鼠清醒后,按照500mg/kg/d计算分别给予实验A组及C组L-精氨酸灌胃。每日换药一次(动物处死当天不换药)。实验A组及B组每天每个创面注射0.05 ml/d的FN,直至处死动物。 4、取材:每组动物分为4组,每幺且3只,分别在术后3、7、10、14天切取原创伤范围内组织,随机将一块组织固定在4%多聚甲醛中,常规石蜡包埋切片,分别行常规HE染色、VG染色及免疫组化染色。剩余的组织于-20℃冷冻保存,行组织化学检测。 5、观察指标: (1)大体观察。 (2)成纤维细胞密度(numerical density on area,NA):400倍光镜下观察HE染色切片,在肉芽组织中央浅部、中央深部、两侧部各随机选取10个矩形视野(0.0052mm<2>/视野),目测计数并计算切片内单位面积成纤维细胞数量,结果取均数。(3)胶原纤维面密度(area density on area,AA):VG染色组织切片,在肉芽组织中央浅部、中央深、两侧部各随机选取5个视野,利用计算机辅助病理图像分析系统,计算红染的胶原纤维的面密度,结果取均数。 (4)按照羟脯氨酸测定试剂盒说明书操作测定肉芽组织羟脯氨酸含量。 (5)对免疫组化染色切片,光镜观察NOS2分布部位和着色深浅程度。采用数码医学图像分析系统,测阳性细胞比率。 (6)术后观察创面愈合情况,并按公式计算创面愈合率愈合率=(原始创面面积一未愈合创面面积)/原始创面面积。 6、统计学处理:用SPSS12.0 for windows统计软件,采用单因素方差分析方法进行统计学处理,数据以X±S表示,P<0.05为差异有统计学意义。 结果: 1、形态学观察:对照组于创伤后14天可以完全愈合:实验A组肉芽组织生长良好,且愈合时间较对照组提前3-4天,实验B组、C组愈合情况良好,较对照组提前1-2天。 2、光镜观察:实验A组在创伤后3天比对照组和实验B、C组均有较多的的毛细血管生成,创伤后14天成纤维细胞排列整齐;实验B、C组于创伤后3天也有较多的毛细血管生成,但较实验A组少,且炎性反应亦较实验A组严重。 3、成纤维细胞密度(NA):实验A、B、C组在创伤后3、7天NA均高于对照组水平(P<0.05),而在创伤后10、14天均低于对照组(P<0.05):而实验A组较B、C组更为明显P<0.01)。 4、胶原纤维面密度(AA):四组均呈持续性增加的趋势,实验A组在所有时间点均高于对照组(P<0.01):B组、C组在所有时间点亦高于对照组(P<0.05)。 5、羟脯氨酸含量:对照组羟脯氨酸含量从创伤后第3天到第14天进行性增加:实验A组在创伤后各时间点羟脯氨酸含量均高于对照组(P<0.01);实验B组和C组在各时间点的的羟脯氨酸含量亦高于对照组(P<0.05)。 6、NOS2阳性细胞比率:对照组伤后3天细胞阳性染色强度增强并达到高峰,3-7天细胞中的NOS2在细胞中的阳性表达相对维持稳定水平,伤后10天细胞中的阳性表达再次达到一个高峰,其后阳性表达逐渐减弱。而实验A、B、C三组创伤后3天开始细胞阳性染色增强,到第10天时达到高峰,其中以A组阳性表达最强(A组P<0.01,B、C组P<0.05),其后阳性表达逐渐减弱。 7、创面愈合率:实验A、B、C三组于3天后创面愈合较对照组明显加快,其中A组较B、C组显著加快(A组P<0.01,B、C组P<0.05)。 结论:在创面的愈合过程中单独使用L-精氨酸或纤维连接蛋白可以促进创面的愈合,而局部外用纤维连接蛋白同时应用L-精氨酸则具有显著的促进创面修复的作用,可以明显加快大鼠创面的愈合时间。
其他文献
意外踏上暗访道路的记者,潜伏十年,在一幕幕惊心动魄、死里逃生中掀开最触目惊心的社会现实。重归平实,他将十年暗访经历写成艺术性、思想性俱佳的著作出版,曝光骗局。一个关
美国科学家研究发现,把野生品种与商用水稻品种进行杂交后,能使产量提高10%-20%。研究人员说,这种水稻杂交的方法具有抗病毒的能力。纽约康奈尔大学的苏珊·麦库奇和她的同事在最近
手足口病(Hand-foot-mouth disease,HFMD)是由不同种肠道病毒引起的常见传染病,以婴幼儿发病为主。我国安徽省阜阳市2008年3月份开始流行的手足口病,经中国疾病预防控制中心(
2006年是中国入世的大限,届时金融领域将全面兑现入世承诺,此前三年的皆大欢喜也许仅仅是“小孩吃药——糖衣在前”。眼下的资本市场正忙着对付宏观调控带来的各种问题,根本
“真实”是新闻流淌着的血液,“责任”是媒体站立着的尊严。每一个新闻人都知道:真实是新闻的生命,是新闻采编工作的第一准则,也是新闻工作者的道德底线。多年来,武汉广电以
人物新闻主要包括人物消息、人物通讯和人物新闻特写等几种体裁样式,每天在各类报纸、杂志的版面上都可以见到各种人物新闻。可以这样说,所有新闻的主角都是人,新闻与 Peopl
目的:本研究通过构建白念珠菌阴道炎小鼠模型,观察山苍子油对白念珠菌阴道炎是否具有治疗及止痒作用,并筛选出可以外用治疗白念珠菌阴道炎的山苍子油的浓度,为山苍子油的临床应用提供实验依据。方法:1白念珠菌阴道炎动物模型的构建:6周龄清洁级雌性昆明小鼠10只。于接种前6天开始隔日皮下注射1mg/ml苯甲酸雌二醇油剂0.1ml,使之处于假发情状态,直至实验结束。在接种日,将密度为2.5×10~6cfu/ml
目的:房室结折返性心动过速(atrioventricular nodal reentrant tachycardia, AVNRT)是一种常见的快速性心律失常,射频消融术已广泛应用于AVNRT的治疗,目前射频消融慢径成为
与英雄一起重温经典,用创新精神唱响欢乐。这就是《欢乐英雄》!自2010年9月开播以来,《欢乐英雄》一直是一档占据中央电视台综艺频道黄金档的大型综艺节目。2011年5月,在整个
“地王”频出的原因到底在哪里?又会带来哪些风险?“地王”是在一定时期某区域土地招拍挂出让过程中成交价单价或总价最高的成交地块。2013年下半年,“地王”频频出现。市场