论文部分内容阅读
目的:检测转录相关酸性卷曲蛋白3(TACC3)在膀胱尿路上皮癌T24细胞系中的表达情况,同时探讨下调TACC3表达水平通过上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的发生对膀胱癌T24细胞迁移和侵袭的影响。方法:采用Western blot方法检测膀胱尿路上皮癌T24细胞系和膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1细胞系TACC3蛋白的表达情况;通过体外构建shRNA表达载体并通过qPCR筛选有效靶点,用TACC3-shRNA相关质粒转染膀胱癌T24细胞系来下调TACC3水平;采用Western Blot和荧光定量PCR技术验证干扰效果,同时检测TACC3和EMT相关mRNA和蛋白的表达水平,细胞划痕试验计算细胞24h修复率,Transwell侵袭试验检测细胞侵袭情况。结果:在膀胱尿路上皮癌T24细胞系及膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1细胞系两组细胞系中,Western Blot结果表明TACC3蛋白相对灰度值分别为:0.22±0.02、0.99±0.05。膀胱癌T24细胞系中TACC3蛋白的表达量明显高于膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1细胞系,差异有统计学意义(P<0.05)。体外构建4个TACC3-shRNA干扰质粒,qPCR检测并筛选TACC3的mRNA表达,获得了对TACC3干扰效率达到90.5%的pYr-LVX-TACC3-shRNA质粒;下调TACC3水平后,荧光定量PCR技术检测TACC3和EMT相关(E-cadherin、Twist、Vimentin、Snail、MMP-9)的mRNA变化情况,结果示:EMT相关指标(E-cadherin、Vimentin、Twist、Snail、MMP-9)的相对mRNA表达量分别为1.11±0.13、0.26±0.04、0.38±0.06、1.11±0.04、0.41±0.03,相应地采用WB方法验证以上Maker的表达变化情况,我们所得到的验证结论就是TACC3和EMT相关(E-cadherin、Twist、Vimentin、Snail、MMP-9)蛋白的相对灰度值分别为1.08±0.06、0.17±0.04、0.07±0.01、0.14±0.01、0.35±0.13。细胞划痕试验检测膀胱T24细胞24h修复率,结果示TACC3-shRNA可抑制T24细胞的迁移达(25.50±0.9609)%(24h);Transwell侵袭试验检测膀胱T24细胞的侵袭程度变化,结果示光镜下平均视野下control组、NC组及shRNA组的平均侵袭细胞数分别为326.8±14.09、311.3±8.664及143.3±10.62,差异有统计学意义。结论:TACC3在膀胱尿路上皮癌T24细胞系中高表达,体外实验证实通过诱导膀胱癌T24细胞的EMT的发生,导入构建的干扰效率为90.5%的pYr-LVX-TACC3-shRNA质粒,下调TACC3的表达后,膀胱癌T24细胞的迁移和侵袭能力下降。提示TACC3可能通过调节EMT的发生来抑制膀胱癌的迁移和侵袭能力,这在膀胱尿路上皮癌中发挥不可或缺的内在作用。并有可能成为膀胱癌基因靶向治疗的重要指标,同时为膀胱癌的新疗法提供新思路。